ИСТИНА

Трансляция является важным процессом в жизнедеятельности всех организмов, в том числе и бактерий. Центральное место в нем занимает рибосома, которая осуществляет синтез белка на основе информации, записанной в матричной РНК (мРНК). Важность роли мРНК заключается не только в передаче наследственной информации с ДНК на рибосому, но и в участии ее различных элементов в регуляции трансляции и определении уровня экспрессии гена, необходимого для нормального функционирования клетки. В ходе исследования с помощью двойной репортѐрной конструкции изучалось влияние на эффективность трансляции длины и состава одного из главных определяющих факторов – 5’-нетранслируемой области бактериальных мРНК, которая может содержать такой отличительный элемент, как сайт связывания рибосомы - последовательность Шайна-Дальгарно. Была использована конструкция, основанная на генах двух флуоресцентных белков RFP и CER, первый из которых (RFP) является внутренним контролем, а экспрессия второго (CER) отражает эффективность той или иной 5’-нетранслируемой области мРНК. Для создания набора плазмид с различными последовательностями, предшествующими стартовому кодону, были использованы олигонуклеотиды с рандомизированными участками. Применение клеточного сортера позволило в зависимости от эффективности трансляции двух флуоресцентных белков RFP и CER с высокой точностью разделять клетки с различными плазмидами. Последующее крупномасштабное секвенирование и применение статистических методов позволило определить мотивы последовательностей с определенным уровнем экспрессии белков. Полученные результаты интересны, с одной стороны, с фундаментальной точки зрения, поскольку позволяют лучше понять, как последовательность 5’-нетранслируемой области бактериальных мРНК влияет на эффективность трансляции. С другой стороны, они могут быть использованы на практике для создания продуктивных систем экспрессии рекомбинантных белков в клетках E. coli.