ИСТИНА

На концах хромосом всех эукариот присутствуют нуклеотидные повторы (у позвоночных TTAGGG), защищающие хромосомы от деградации и концевого слипания, - теломеры. Из-за концевой недорепликации в процессе жизни клеток с каждым актом деления теломеры укорачиваются, пока не достигнут критической длины, после чего клетка гибнет. Чтобы этого не произошло раньше времени, существует фермент теломераза, активный в большинстве раковых клеток, в половых и стволовых клетках. Это рибонуклеопротеидный комплекс, состоящий из белкового компонента TERT и теломеразной РНК TER. С теломерами связан белковый комплекс, состоящий из множества белков, - шелтерин. В литературе показано, что одним из белков, ассоциированных с шелтерином, является белок PARP1. PARP1 - это поли(АДФ-рибоза)-полимераза, которая является одним из ранних сенсоров на повреждения ДНК. Известно, что у долгожителей уровень активности этого белка больше, чем у обычных людей. Также ингибирование PARP1 считается перспективным лечением тех типов рака, в клетках которых есть дефектные белки семейства BRCA. Основываясь на этих данных, мы приняли решение получить стабильные клеточные линии человека с суперэкспрессией PARP1, проверить активность теломеразы в них, определить колокализацию PARP1 и белков шелтеринового комплекса TRF1 и TRF2, определить среднюю длину теломер в клеточной популяции и проверить, как ведут себя концы хромосом клеток в метафазе митоза. Также мы хотим получить стабильные клеточные линии, экспрессирующие малые шпилечные РНК, которые затем разрезаются специальным внутриклеточным комплексом до малых интерферирующих РНК, подавляющих экспрессию PARP1, и провести те же исследования, что и с клетками, суперэкспрессирующими PARP1. Нами отработаны методика иммуногистохимического окрашивания белков антителами, методика мечения теломер на метафазных хромосомах (FISH), получены различные конструкции, кодирующие PARP1 и слитый с синим флуоресцентным белком PARP1. Также получены лентивирусные конструкции для экспрессии малых шпилечных РНК и стабильные клеточные линии HEK293 на их основе.