ИСТИНА

В ходе биосинтеза белка к транслирующей рибосоме присоединяются особые белки — трансляционные факторы. У эукариот факторы терминации eRF3 и элонгации eEF1A доставляют в А-сайт рибосомы соответственно eRF1 (фактор гидролиза связи пептидил-тРНК) и аминоацил-тРНК. У архебактерий функции доставки выполняет один белок (aEF1), что в купе с высокой гомологией eRF3, eEF1A и aEF1 позволяет предположить возможность перекрёстной активности эукариотических факторов в процессе биосинтеза белка. В нашей работе мы изучали влияние фактора элонгации eEF1 на терминацию трансляции эукариот. Для исследования мы использовали реконструированную in vitro систему трансляции эукариот, метод toe-print для определения положения рибосомного комплекса, с помощью меченых аминоацил-тРНК следили за кинетикой гидролиза связи пептидил-тРНК в ходе терминации трансляции. Метод toe-print основан на реакции обратной транскрипции. Величина кДНК 232 фрагментов означает расстояние, которое проходит ревертаза до встречи с препятствием — рибосомой, и отражает таким образом движения самой рибосомы. В ходе исследования мы показали, что в процессе терминации происходит характерный сдвиг toe-print сигнала, который наблюдается при добавлении eRF1, а при добавлении eRF3 имеет гораздо большую интенсивность. Аналогичный результат был получен для смеси eRF1 и eEF1, но только в присутствии аминоацил-тРНК. В ходе изучения гидролиза пептидил-тРНК было показано, что eRF1 имеет низкую собственную гидролизную активность, которая возрастает при добавлении eRF3. Увеличение активности наблюдалось и при добавлении аминоацил-тРНК и eEF1, однако имело гораздо меньшую интенсивность. Из всего этого мы сделали следующие выводы: элонгационный фактор эукариот eEF1 в присутствии аминоацил-тРНК стимулирует конформационный переход терминационного комплекса аналогично терминационному eRF3, eEF1 в присутствии аминоацил-тРНК увеличивает эффективность гидролиза пептидил-тРНК фактором eRF1.