ИСТИНА

Важной проблемой при лечении ВИЧ-инфекции является возникновение лекарственно устойчивых форм вируса. Перспективным подходом к решению этой проблемы является разработка ингибиторов взаимодействия вирусных белков с клеточными белками-помощниками. Однако развитие этого подхода тормозится из-за недостаточности знаний об участии клеточных белков в патогенезе ВИЧ-инфекции. Важной стадией репликации ВИЧ-1 является интеграция ДНК вируса в геном клетки, катализируемая вирусной интегразой. В результате интеграции в геноме возникают повреждения, без репарации которых репликация вируса невозможна [1]. Точно неизвестно, какие клеточные белки вовлечены в репарацию и как они взаимодействуют с интегразой. С целью идентификации этих белков, мы провели сравнительный анализ протеомных исследований по двум направлениям: 1) идентификация клеточных белков, входящих в состав прединтеграционного комплекса, 2) поиск белков из систем репарации ДНК, изменение уровня которых в клетке влияет на репликацию ВИЧ-1. В результате был найден белок Ku70, который участвует в репарации двуцепочечных разрывов в ДНК в составе ДНК-зависимой протеинкиназы (ДНК-ПК) [2]. Мы использовали клетки линии HEK293T с пониженным уровнем компонентов ДНК-ПК для анализа их влияния на эффективность постинтеграционной репарации и показали, что для всех мутантных линий она снижается в 2-4 раза. Снижение эффективности репарации коррелирует со снижением уровня экспрессии люциферазы, закодированной в векторе. Изучение взаимодействия Ku70 с интегразой показало, что эти белки образуют стабильный комплекс in vitro. В составе Ku70 сайт связывания интегразы локализован в N-концевом домене. Со стороны интегразы в связывании Ku70 участвуют остатки E212 и L213, их замены значительно снижают стабильность комплекса. При трансдукции клеток вектором, содержащим интегразу с заменами E212А/L213А, оказалось, что эффективность репарации в 2-4 раза ниже, чем для вектора с интегразой дикого типа, и не зависит от уровня компонентов ДНК-ПК. Следовательно, для успешной репарации необходимо взаимодействие интегразы ВИЧ-1 с клеточным белком Ku70. Образование комплекса интегразы с Ku70 является сигналом для запуска постинтеграционной репарации, и этот комплекс может рассматриваться как новая мишень для разработки ингибиторов репликации ВИЧ-1.