ИСТИНА

Ранее были созданы рецептор-селективный вариант TRAIL DR5-B, который селективно связывается с рецептором смерти DR5, не проявляя аффинности к другим рецепторам цитокина (DR4, DcR1, DcR2, OPG), а также мутантный вариант TRAIL DR5-B V114C с мутацией V114С на N-конце полипептидной цепи для ковалентной конъюгации белка с малеимидными группами различных соединений. Также ранее был описан способ получения вариантов цитокина TRAIL путем экспрессии в штамме E. coli BL21(DE3) в виде гибридного белка с тиоредоксином. Этот способ позволял получить препаративные количества растворимого белка, однако качество очистки не удовлетворяло требованиям, предъявляемым к лекарственным препаратам. В данной работе был получен новый плазмидный вектор pET-32a/dr5-b-v114c, который не содержит Trx-, His- и S-тагов и служит для прямой экспрессии целевого белка DR5-B V114C. Вектор pET-32a/dr5-b-v114c был трансформирован в высокопроизводительный штамм E. coli SHuffle B. Целевой белок DR5-B V114C был очищен из растворимой фракции цитоплазматических белков. Благодаря комбинированию аффинной хроматографии на сорбентах Ni-NTA и Pierce High Capacity Endotoxin Removal Resin и ионообменной хроматографии на сорбенте SP Sepharose удалось повысить степень очистки от низкомолекулярных белковых примесей и бактериальных эндотоксинов, а также сократить количество стадий очистки. Препарат DR5-B V114C, полученный новым способом, эффективно индуцировал апоптоз в линиях опухолевых клеток Т- клеточной лейкемии Jurkat и колоректальной карциномы HCT116. Работа поддержана грантом РФФИ № 18-34-00812.