ИСТИНА

В процессе естественного старения, а также при некоторых заболеваний в клетках ретинального пигментного эпителия наблюдаются изменения. Кроме различных морфологических изменений накапливаются также изменения биохимического состава, в частности, накапливаются особые пигментные гранулы, такие как липофусциновые (ЛГ) и меланолипофусциновые гранулы (МЛГ), кроме того одновременно уменьшается количество меланин-содержащих меланосом [1]. Наиболее вероятной причиной данных процессов является химическая деградация меланина в меланосомах в окислительных и фотоиндуцированных реакциях. Однако данный механизм в настоящий момент недостаточно изучен. Представляет интерес изучение продуктов и механизмов окислительных реакций, приводящих к деградации меланосом и образованию гранул. В данной работе при помощи метода времяпролетной масс-спектрометрии вторичных ионов (ToF-SIMS) было произведено сравнение контрольных образцов липофусциновых и меланолипофусциновых гранул с окисленными формами липофусциновых и меланлипофусциновых гранул, полученных обработкой надпероксидом калия, как было показано ранее [2]. Также было произведено сравнение супернатантов всех образцов, полученных при центрифугировании соответствующих гранул. Для выявления различий на масс-спектрах образцов был использован анализ методом главных компонент (PCA). PCA анализ позволяет выявить достоверность различия спектров, а также определить пики, обуславливающие наибольшее различие между образцами. Было установлено достоверное различие между окисленными и контрольными образцами, как для ЛГ, так и для МЛГ. Кроме того, процедура центрифугирования приводит удалению осадка биоматериала, что также существенно сказывается на масс-спектрах. В частности уменьшается сигнал пиков, связанных с липидами биомембран. На рис. 1а показаны координаты экспериментальных данных в осях первой и второй главной компоненты (PC 1, PC 2). Данные приведены для окисленных и неокисленных МЛГ, а также соответствующих супернатантов. Были выявлены пики, отвечающие за максимальную вариацию в данных, обусловленную образованием продуктов окисления. На рис. 1б показана относительная интенсивность некоторых из данных пиков, то есть интенсивность пика в образце была нормирована на соответствующую интенсивность в контрольном образце. Видно, что обработка надпероксидом привела к значительному увеличению выхода данных ионов (в несколько раз и более). Работа была выполнена при поддержке гранта РФФИ № 18-33-00940\18.