ИСТИНА

Целью работы было исследование влияния аллостерической активации Са2+ унипортера митохондрий печени крысы ионами Са2+ на кинетику электрогенного транспорта Са2+. Митохондрии деэнергизовали ротеноном и инкубировали с Са2+ различное время до добавки сукцината, которой инициировали поглощение Са2+. Транспорт Са2+ регистрировали методом двухволновой спектрофотометрии с Са2+-индикатором арсеназо III. Был обнаружен экспоненциальный рост начальных скоростей транспорта Са2+ по мере увеличения времени преинкубации деэнергизованных митохондрий с Са2+. Это ускорение транспорта можно считать результатом известной из литературы Са2+-зависимой аллостерической активации унипортера, поскольку эффект отсутствовал, если преинкубация проводилась без Са2+, и не сопровождался изменениями кинетики генерации трансмембранного потенциала. Было показано, что концентрационная зависимость начальных скоростей поглощения Са2+ митохондриями с не активированным унипортером имела сигмоидную форму и трансформировалась в гиперболу для митохондрий, предварительно инкубированных с Са2+. Известные из литературы кинетические модели объясняют сигмоидную форму обсуждаемой кривой положительным кооперативным взаимодействием между несколькими транспортными центрами и не учитывают смену порядка реакции транспорта. Полученные данные позволяют объяснить вариабельность кинетики транспорта Са2+ с позиций кинетической кооперативности между сравнительно медленной активацией унипортера и быстрым транспортом Са2+. Под активацией подразумевается переход единственного транспортного центра унипортера из неактивного в активное состояние после насыщения одного аллостерического регуляторного центра ионами Са2+, а не увеличение сродства транспортного центра к Са2+. Согласно предлагаемой модели, по мере приближения количества активного унипортера к стационарному уровню лимитирующая стадия поглощения Са2+ изменяется с активационной на транспортную, а порядок реакции снижается до первого.