ИСТИНА

Гемагглютинин ─ один из двух основных поверхностных белков вируса гриппа, в значительной мере определяющий его инфекционные и антигенные свойства. Аптамеры являются короткими синтетическими олигонуклеотидами, обладающими третичной структурой и способностью связываться с мишенью высокоаффинно и специфично. В литературе описаны несколько ДНК-аптамеров к гемагглютинину. На их основе были разработаны сенсоры для обнаружения вируса гриппа, однако, экспрессные методы проигрывают в чувствительности по сравнению с ИФА, применяемым в клинической практике. Спектроскопия гигантского комбинационного рассеяния (ГКР, SERS) даёт возможность достичь усиления сигнала от метки в 106-109 раз за счёт плазмонного резонанса на наноструктурах металлов. Сочетание высокой аффинности аптамеров с уникальной чувствительностью SERS перспективно для создания аптасенсоров для детектирования вируса гриппа А. Для определения кажущихся констант связывания аптамеров с гемагглютининами в составе цельных вирусных частиц была разработана оригинальная методика на основе аптаферментного анализа (аналога ИФА). Известные из литературы и модифицированные аптамеры были протестированы на связывание с широким набором штаммов вируса гриппа А. Парамиксовирусы и существенно отличающийся по антигенным свойствам вирус гриппа B были использованы как отрицательный контроль. Для аптамера RHA0385 и его аналогов с измененной последовательностью были определены константы связывания с помощью метода поверхностного плазмонного резонанса (SPR). Был выбран 28-нуклеотидный аптамер с широкой штамм-специфичностью и высокой константой связывания. На его основе был создан прототип SERS-аптасенсора для обнаружения вируса гриппа. На кремниевой подложке, покрытой SiO2 и наноструктурированным слоем серебра, собирали тройной комплекс из тиомодицифированных аптамеров, вируса гриппа и меченых Раман-активной меткой аптамеров. Разработанный SERS-аптасенсор обладал широкой штамм-специфичностью и пределом обнаружения ниже, чем у используемых экспресс-методов.