ИСТИНА

Фторхинолоны – группа синтетических антимикробных средств широко применяемых в медицине. Вещества хинолоновой природы подразделяются на 4 поколения, первое – нефторированное, остальные, фторированные, делятся в зависимости от своей активности в отношении микроорганизмов. Всего, на данный момент времени, насчитывается более 20 соединений хинолоновой структуры, и список постоянно пополняется. В виду того, что фторхинолоны широко применяются и при лечении животных, актуальна разработка быстрых и надежных методов их определения в продуктах питания животного происхождения, таких как молоко, мясо крупного и мелкого рогатого скота, рыба, печень, почки. Одним из наиболее перспективных с точки зрения экспрессности, высокой специфичности, низкой стоимости и простоты проведения анализа является иммунохимический метод поляризационного флюороиммуноанализа (ПФИА). В ходе разработки методики ПФИА основным этапом является получение специфичных антител. Фторхинолоны – низкомолекулярные вещества (гаптены), что обуславливает дополнительный этап – синтез конъюгатов с бычьим сывороточным альбумином (БСА) для повышения иммуногенности антигена. Интерес представляет группоспецифический анализ и анализ индивидуальных фторхинолонов. В результате того, что хинолоновые структуры чрезвычайно схожи, очень часто получаемые антитела обладают широкой перекрестной специфичностью, что является серьезной проблемой при создании иммунохимических систем для определения индивидуальных фторхинолонов. Поэтому, для повышения специфичности антител, при синтезе конъюгатов был использован БСА, активированный диэтиламином. В данной работе для получения поликлональных антител на офлоксацин, левофлоксацин, энрофлоксацин и пефлоксацин используются кролики калифорнийской породы. Мониторинг титра антител проводится по возрастанию поляризации флюоресценции с помощью прибора TDx фирмы Abbott Diagnostics, позволяющего одновременно проводить 10 измерений аналитического сигнала. Для нескольких фторхинолонов синтезирован ряд трейсеров с различными флуоресцентными метками (EDF, FITC), с которыми проверяются получаемые антитела и разрабатываются методики определения фторхинолонов методом ПФИА. Работа выполнена при поддержке грантов ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009–2013 гг. (государственный контракт № 16.740.11.0158 от 2 сентября 2010 г.) и РФФИ «Изучение механизма энантио-селективного распознавания хиральных гаптенов молекулами антител с использованием офлоксацина в качестве модели» (11-04-91189-ГФЕН_а).