ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИПМех РАН |
||
ВВЕДЕНИЕ и ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Сепсис – тяжелое инфекционное заболевание, развивающееся вследствие появления и циркуляции в крови патогенных микроорганизмов, продуцируемых ими токсинов и продуктов деградации, таких, как липополисахарид (ЛПС). Лечение сепсиса включает антибактериальную терапию и ЛПСадсорбцию. В последнее время все более острой проблемой становится антибиотикорезистентность патогенных микроорганизмов. Для проведения процедур ЛПС адсорбции доступны несколько коммерческих систем: колонка ТОКСИПАК® (НПФ «ПОКАРД», Россия), картридж TORAYMYXIN® (TorayMedicalCo., Япония), колонка LPSAdsorber® (AltecoMedical, Швеция). Эффективность удаления ЛПС различными системами была сопоставленав invitroэксперименте, в одинаковых условиях, моделирующих клиническую процедуру. Колонка ТОКСИПАК® показала более высокую эффективность по сравнению с колонкой LPSAdsorber® и сравнимую с картриджем TORAYMYXIN® PMX-20R.Разработка новых сорбционных материалов для лечения бактериемии и сепсиса является актуальной задачей. МАТЕРИАЛЫ и МЕТОДЫ. Для разработки нового поколения сорбентов использовали агарозную матрицу с размером пор 200 мкм, нативныйи модифицированный бактериолитический фермент. Сравнение новых сорбентов с активным ингредиентом колонки ТОКСИПАК® проводили в серии экспериментов с (1) раствором эндотоксина E.coli либо P.aeruginosa, где концентрация варьировалась от 20 до 200 нг/мл,(2) плазмой и (3) кровью здорового донора, содержащей в качестве антикоагулянта цитрат натрия или гепарин натрия.Условия проведения хроматографии варьировались в зависимости от эксперимента – соотношение объема физиологического раствора/плазмы/крови к объему сорбента составляло 5/10/20 к 1, время контакта составляло 1 час.В образцах «до» и «после» хроматографии измеряли активность эндотоксина (Hycultbiotech, Нидерланды), концентрацию альбумина (Analyticon, Германия) ииммуноглобулинов G(IgG) (Вектор Бест, Россия).Динамику форменных элементов крови и концентрацию гемоглобина определяли при помощи гематологического анализатора Elite 3 (Erba, Чехия). РЕЗУЛЬТАТЫ.В результате разработки сорбента с иммобилизованным в качестве лигандабактериолитическим ферментомбыла показана ограниченная эффективность такого подхода – с увеличением исходной концентрации эндотоксина в растворе с 20 до 200 нг/мл, эффективность сорбцииснижалась с 97% до 9%. Кроме того,сорбция альбумина из плазмы крови составила26±5%, иммуноглобулинов G– 41±0%, т.е. сорбент не являлся инертным по отношению к мажорным белкам плазмы. С целью увеличения эффективности и специфичности сорбции была проведена химическая модификациябактериолитического фермента. Функциональные свойства сорбента, содержащего химически модифицированный лиганд, были сравнимы с таковыми для сорбента ТОКСИПАК® - сорбция эндотоксина из раствора с концентрацией 200 нг/мл составила 96±1% и 95±1%, альбумина – 24±13% и 12±1%, IgG – 19±7% и 8±1% соответственно. Результаты исследования гемосовместимости сорбента после химической модификации лиганда показали, что сорбент не оказывал влияния на количество эритроцитов, их форму и не вызывал гемолиза. Однако, режим антикоагуляции с использованиемцитратанатрия, рекомендуемый производителем для колонок ТОКСИПАК®, для нового сорбента не является оптимальным – снижение тромбоцитов составило 78±2%. Применение в качестве антикоагулянта гепарина натрия в дозировке 2,5 Ед/мл крови позволило существенно снизить адгезию тромбоцитов на сорбенте до 4±3%. ВЫВОДЫ. Новое поколение сорбентов с иммобилизованным химически модифицированным бактериолитическим ферментом может оказаться перспективной альтернативой антибактериальной терапии при лечении сепсиса, вызванного резистентными штаммами бактерий.