ИСТИНА

Несмотря на впечатляющие успехи, достигнутые в изучении биологии ядерного актина, целый ряд особенностей функционирования этого белка в ядре остается недостаточно исследованным. В частности, ощущается недостаток сравнительных данных об организации актинового компонента кариоскелета в ядрах клеток разного типа и происхождения; пока остается неясным существует актин в клетке в форме единого пула, или же ядерной и цитоплазматической субпопуляций; остается необъясненным феномен появления в ядре полимерного актина в ответ на стрессовое воздействие на клетку. В данной работе мы представляем сведения о влиянии гипотонического стресса, а именно – снижения осмотичности культуральной среды в два раза по сравнению с оптимальным значением, на локализацию актина в ядре и цитоплазме зародышей мыши, находящихся в конце двухклеточной стадии развития. Мы использовали флуоресценный конъюгат ДНКазы I для мечения мономерного актина, ТРИТЦ-фаллоидин – для фибриллярного актина, а также антитела к фрагменту N-концевого домена актина, которые визуализируют актин без учета принимаемых им функциональных форм. В ядрах контрольных зародышей фаллоидин-меченный фибриллярный актин обнаружен не был, нуклеоплазма содержала мономерный актин, однако проядрышки – ассоциированные с конденсированным хроматином ядерные структуры, типичные для раннего эмбриогенеза млекопитающих, флуоресцентной ДНКазой I не метились. Иммунофлуоресцентное мечение актина подтверждало наличие актина в нуклеоплазме при его отсутствии в составе проядрышек. У помещенных в гипотонические условия зародышей в течение первых 10-15 мин, происходило увеличение объема бластомеров до той максимальной величины, которая может быть достигнута в пределах блестящей оболочки. После окрашивания флуоресцентной ДНКазой I у большинства зародышей наблюдали отсутствие свечения ядер, что может указывать либо на резкое снижение в них содержания мономерного актина, либо на появление конкурентной по отношению к маркеру ассоциации мономеров актина с каким-либо белком. В ядрах эмбрионов появился ранее там отсутствовавший фаллоидин-меченный актин, который визуализировался в нуклеоплазме, но не в проядрышках. Описанный выше характер распределения мономерного и фибриллярного актина наблюдался и в ядрах эмбрионов, инкубированных в гипотонической среде в течение 30-40 мин, когда, благодаря функционированию регуляторных механизмов, объем бластомеров уменьшается почти до нормы. Однако характер мечения ядер таких зародышей антителами к фрагменту N-концевого домена молекулы актина существенно отличался от наблюдавшегося в контрольной группе: после воздействия гипотонии в границах ядер бластомеров наблюдалось равномерное свечение, места локализации проядрышек могли быть выявлены только при использовании двойного окрашивания с ДАФИ. Основываясь на наших наблюдениях можно предположить, что в ранних эмбриональных ядрах гипотонический стресс индуцирует полимеризацию содержащегося в них мономерного актина, и что у зародышей, успешно компенсировавших резкое увеличение объема, часть ядерного актина, не являющегося ни мономерным, ни фибриллярным, солокализована с проядрышками.