ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИПМех РАН |
||
Условно-патогенные грамотрицательные бактерии Acinetobacter baumannii – один из наиболее распространенных возбудителей внутрибольничных инфекций. Их лечение осложняется способностью бактерий приобретать и накапливать различные механизмы антибиотикоустойчивости, что делает актуальным поиск альтернативных способов борьбы с инфекциями. Ими могут стать фаготерапия, основанная на лизисе бактериальных клеток вирусами бактерий – бактериофагами, и вакцинотерапия с использованием конъюгатных иммунопрепаратов. Клетки A. baumannii окружены защитной капсулой, состоящей из капсульного полисахарида (КПС). Широкое структурное разнообразие КПС A. baumannii обусловлено вариабельностью генного состава хромосомного локуса, кодирующего ферменты, участвующие в биосинтезе КПС. В настоящей работе изучены КПС семи штаммов A. baumannii, выделенных от больных в различных госпиталях. КПС выделяли методом водно-фенольной экстракцией бактериальных клеток по методу Вестфаля и очищали с помощью гель-проникающей хроматографии. Моносахаридный состав КПС определяли анализом ацетатов полиолов методом газожидкостной хроматографии. Строение КПС устанавливали с помощью ЯМР-спектроскопии 1H и 13C с использованием двумерных экспериментов 1H,1H COSY, 1H,1H TOCSY, 1H,1H ROESY, 1H,13C HSQC и 1H,13C HMBC. С целью создания биохимической основы для фаготерапии ацинетобактерных инфекций выяснены механизмы расщепления КПС A. baumannii рекомбинантными деполимеразами специфических бактериофагов (КПС штаммов B05 и AbWRMAC3340) или деполимеразами, полученными из профагов, обнаруженных в геномах A. baumannii (КПС штаммов AYE, AB5256 и B8300). Олигосахаридные продукты расщепления фракционировали с помощью гель-проникающей хроматографии и исследовали методами масс-спектрометрии высокого разрешения с ионизацией электрораспылением и одномерной и двумерной ЯМР-спектроскопии. Все деполимеразы обладали гликозидазной активностью и специфически расщепляли одну из гликозидных связей в повторяющихся звеньях КПС по гидролитическому механизму, давая мономеры и/или олигомеры (димеры или в одном случае тример) повторяющихся звеньев КПС. Полученные олигосахариды могут быть использованы для получения конъюгатных вакцин против ацинетобактерных инфекций. Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ 17-04-0125.