ИСТИНА

Хроническая инфекция вирусом гепатита В является основной причиной развития гепатоцеллюлярной карциномы. Считается, что белок Х этого вируса (HBx) играет ключевую роль в индукции окислительного стресса и в канцерогенезе. Есть данные о способности НВх изменять эпигенетическую регуляцию хозяйских генов за счёт гиперметилирования их промоторов. В этих процессах, возможно, участвуют активные формы кислорода (АФК): при гепатоклеточной карциноме окислительный стресс вызывает гиперметилирование в промоторах каталазы и Е-кадгерина, в результате чего снижается экспрессия этих белков. Для изучения механизмов регуляции экспрессии ключевых генов, участвующих в канцерогенезе мы сделали конструк-цию с HBx на основе лентивирусного вектора. В качестве модельной культуры использовали клетки линии HepG2. Экспрессию оценивали с помощью ПЦР в реальном времени, в качестве контроля использовали конструкцию, с мутантным нефлуоресцирующим GFP. Клетки, экспрессирующие HBx отличались более вытянутой, фибробластоподобной формой, в то время, как контрольные клетки демонстрировали более округлую, эпителиоидную форму. HBx также вызывал в HepG2 окислительный стресс, повышая уровень АФК по сравнению как с диким типом (на 50%), так и с клетками, трансдуцированными контрольной конструкцией (на 20-30%). Экспрессия HBx не приводила к значительному изменению паттерна метилирования промоторов генов каталазы и E-кадгерина; а также не уменьшала относительный уровень их мРНК. Экспрессия ряда других потенциальных генов-мишеней для белка HBx также менялась незначительно. В то же время, в наших образцах значительно менялся уровень экспрессии гена актина, и использование этого гена как референсного (что свойственно многим работам в данной области) позволило бы сделать ложный вывод о значительном снижении уровня экспрессии каталазы и E-кадгерина в клетках, экспрессирующих HBx. Полученные данные подтверждают действие НВх как индуктора окислительного стресса, но вместе с тем опровергают данные о действии НВх на экспрессию и эпигенетическую модификацию генов E-кадгерина в клетках HepG2. Работа поддержана грантом РФФИ № 17-00-00088.