ИСТИНА

Аналогами инсулина называют искусственно модифицированные молекулы гормона, которые за счет изменения активности по сравнению с регулярным инсулином позволяют усовершенствовать метаболический контроль уровня глюкозы в крови у больных сахарным диабетом. Известно, что мономерный инсулин, в 20%-ной уксусной кислоте, обладает свойством формировать амилоидные фибриллы, что используется для изучения фибриллогенеза. В то же время особенности формирования фибрилл аналогами инсулина изучены недостаточно. Целью настоящей работы было исследование особенностей фибриллогенеза аналогов инсулина человека короткого (лизпро) и длительного действия (гларгина), в условиях 20 % уксусной кислоты (pH 2.0), 140 мМ NaCl, 37 °C, методом флуоресцентной спектроскопии за счет связывания с тиофлавином Т (ThT). Бесцинковые препараты лизпро и гларгина были предоставлены сотрудниками АО «Научно Производственная Корпорация Биоран» и ИБХ РАН им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова соответственно. Ранее нами было показано, что лаг-период для рекомбинантного инсулина составляет 6-7 часов и активная полимеризация фибрилл инсулина происходит после 8-9 часов инкубации (для концентрации белка 4 мг/мл, в условиях 20 % уксусной кислоты (pH 2.0), 140 мМ NaCl, 37 °C). В тех же условиях для лизпро отмечается удлинение лаг-периода на 5 часов. На основе кинетических кривых интенсивности флуоресценции ThT была предложена модель механизма формирования амилоидных фибрилл для инсулина и лизпро. В данной работе были получены кинетические кривые зависимости изменения флуоресценции ThT в процессе фибриллообразования препаратов гларгина различной концентрации. Так для концентрации белка 4 мг/мл было продемонстрировано удлинение лаг-периода до 22-24 часов, что позволяет сделать вывод о том, что формирование фибрилл гларгина происходит медленнее, чем формирование инсулиновых фибрилл. Кроме того было изучено влияние аминокислот - фенилаланина, глицина, лейцина - на фибриллогенез лизпро. Использованные в исследовании аминокислоты с разной эффективностью замедляли рост тиофлавиновой флуоресценции.