![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Поли(АДФ-рибоза-)полимераза-1 (PARP-1) является распространенным ядерным белком, который вовлечен в разнообразные клеточные процессы: репарацию, транскрипцию, репликацию, регуляцию клеточного цикла и апоптоз. Широкий спектр активностей PARP-1 обусловлен как функцией поли-АДФ-рибозилирования, так и способностью фермента взаимодействовать с различными формами ДНК в составе хроматина. Нарушение метаболизма PARP-1 сопряжено с развитием прогерии, опухолевых, сердечно-сосудистых, и нейродегенеративных заболеваний. Ингибиторы PARP-1 (PARPi) используются в клинике в качестве противоопухолевых лекарств, и исследуются применительно к терапии других метаболических заболеваний. Предполагается, что помимо ингибирования ферментной активности PARPi могут вызывать арест (траппинг) комплексов PARP-1 с ДНК в составе хроматина. «Арестованные» комплексы являются препятствием для нормального прохождения процессов репарации ДНК в хроматине, что приводит к сильному цитотоксическому эффекту. Для поиска и изучения PARPi нами предложено использовать нуклеосомные системы, моделирующие первый уровень структурной организации хроматина. Применяя флуоресцентные мононуклеосомы в комбинации с методами FRET-микроскопии одиночных частиц и гель-шифт анализа нами установлены структурные изменения, происходящие в нуклеосомах при взаимодействии с PARP-1 и проведен сравнительный анализ трех известных PARPi (олапариба, талазапариба и велипариба) по эффективности траппинга комплексов PARP-1 с нуклеосомами. В докладе представлены результаты исследования 7-метилгуанина (7МГ) и госсипола, которые являются потенциальными PARPi. Показано, что 7-МГ способен к траппингу PARP-1 на нуклеосомах, но в меньшей степени, чем олапариб, талазапариб и велипариб. Установлено, что госсипол при низких концентрациях не обладает траппинг-активностью, а при увеличении концентрации вызывает структурные изменения в нуклеосомах, приводящие к диссоциации гистонов и высвобождению свободной ДНК. В докладе обсуждаются преимущества и перспективы применения нуклеосомных систем для поиска новых PARPi и изучения механизмов их действия на уровне нуклеосом.