ИСТИНА

Рак прямой кишки на сегодняшний день является проблемой мирового масштаба. По данным Национального института рака США на ранних стадиях уровень пятилетней выживаемости составляет 92%, на второй стадии 72%, на третьей стадии 44%, а на четвертой стадии показатель пятилетней выживаемости не превышает 8%. Однако несмотря на совершенствование рентгено- и эндоскопических методов обследования, до настоящего времени не удалось существенно повысить выявляемость больных колоректальным раком на ранних стадиях заболевания. На сегодняшний момент одним из наиболее эффективных методов является позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ). Однако данный метод обладает существенным недостатком – чрезвычайно высокая цена исследовательского оборудования. В связи с этим чрезвычайную важность приобретает создание и развитие новых альтернативных методов и систем диагностики онкологических заболеваний, выделение групп риска и проведение скринингового обследования (анализа биоты), для выявления предраковых состояний и раннего выявления злокачественных новообразований. Существующий в научной литературе подход, заключающийся в исследовании образцов биоты для установления идентифированных специфичных соединений (т.н. маркеров) и количественном определении их содержаний, не всегда успешен и часто служит в медицине для оценки реакции опухоли на лечение. В настоящем исследовании предполагается сформировать алгоритм получения и интерпретации протео-метаболических и хромато-масс-спектрометрических профилей больных и здоровых людей, как единых обобщенных маркеров, позволяющий проводить раннюю диагностику и прогнозирование лечения рака прямой кишки. В ходе работы в исследование включено 40 пациентов, проходящих лечение в ФГБУ «ГНЦК им. А.Н. Рыжих». 27 пациентов с колоректальным раком и 13 пациентов с другими заболеваниями, у которых при обследовании исключен рак толстой кишки. В группу исследования входят мужчины и женщины от 18 до 80 лет, подтвержденные раком толстой кишки от 1 до 4 стадии. В критерии исключения входят пациенты с инфекцией мочеполовой системы, с тяжелыми сопутствующими заболеваниями обмена веществ, в частности, диабет и гломерулонефрит. А также исключены пациенты основной группы и ранее перенесенные операции рака и полипов толстой кишки. В группу контроля («здоровые») включены мужчины и женщины от 18 до 80 лет, у которых исключен рак, полипов толстой кишки, по данным колоноскопии, выполненной не позднее 3 месяцев. В основной группе один из заборов образцов производился перед операцией, второй – во время операции, третий – в послеоперационном периоде на 7-9 день. В контрольной группе забор образцов осуществли с интервалом в 3 дня. Непосредственно после забора образцы мочи по 15 мл помещали в 3 пробирки и замораживают в морозильной камере не выше -20°С. В отличие от традиционных способов исследования образцов биоты для установления специфичных биомаркеров, на стадии пробоподготовки нами исключено использование картриджей с ионообменными материалами для удаления солей и матрицы, так как в настоящем исследовании необходимы все компоненты биоты для создания общих профилей больных и здоровых людей. Для протеомного анализа 0.4 мл аликвоты мочи после доведения до комнатной температуры отцентрифугированы в течении 10 мин, а затем разбавлены водой в соотношении 1:3. После разбавления водой анализируемый образец снова центрифугировали (15 мин) и фильтровали на нейлоновом фильтре (0,2 мкм). По литературным данным выбраны условия анализа образцов мочи методом ВЭЖХ-МС/МС. Для проведения анализа использовали колонку Zorbax Extend-C18 (2 x 100 мм; 1.8 мкм) с предколонкой. В качестве подвижной фазы выбраны ацетонитрил и вода с градиентом до 6 мин 20%, с 6 мин по 9 мин 45%, затем с 9 мин по 15 мин 98%. Скорость потока составляет 0.35 мл/мин. МС детектирование произведено при положительной, так и в отрицательной ионизации с диапазоном масс от 100 до 1200 m/z. Отмечено, что при анализе биологических образцов человека большую роль играет индивидуальный метаболизм, в связи с этим после проведения сравнительного скрининга биоты больных и здоровых людей без идентификации отдельных соединений, необходимо с помощью методов математической статистики провести оценку электрофоретических, хроматографических (хромато-масс-спектрометрических) образов, как нового потенциального мета-биомаркера онкологических заболеваний.