ИСТИНА

Оксидаза D-аминокислот (DAAO, КФ 1.4.3.3) катализирует реакцию образования α-кетокислот с выделением пероксида водорода и иона аммония, используя в качестве субстратов соответствующие D-аминокислоты и молекулярный кислород. Данный фермент находит широкое практическое применение в различных областях биотехнологии. Это и синтез α-кетокислот, получение неприродных L аминокислот, отдельно стоит отметить процесс получения 7-аминоцефалоспорановой кислоты, из которой затем получают цефалоспориновые антибиотики различных поколений. Для эффективного практического применения необходимо проводить оптимизацию свойств природного фермента под цели и задачи конкретного биотехнологического процесса, что в свою очередь невозможно без детальной информации о взаимосвязи структуры и функции фермента. Целью данной работы стало изучение кислородного канала оксидазы D-аминокислот c помощью методов молекулярного моделирования и направленного мутагенеза. Для данной цели в нашей лаборатории был проведен анализ кислородного канала оксидазы D-аминокислот из дрожжей Trigonopsis variabilis с помощью пакета программ VMD/NAMD. С помощью метода implicit ligand sampling была установлена область кислородного канала и проведен скрининг возможных аминокислотных замен, приводящих к уменьшению свободной энергии связывания кислорода в этой области. По результатам работы получены мутантные формы фермента с подобранными заменами, проведена экспрессия, очистка и характеризация данных ферментов.