ИСТИНА

Еремин С.А. ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ И ТОКСИЧНЫХ ВЕЩЕСТВ МЕТОДОМ ПОЛЯРИЗАЦИОННОГО ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО ИММУНОАНАЛИЗА Химический факультет, Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Москва Профессор, доктор химических наук, ведущий научный сотрудник тел.: (495)9394192, e-mail: saeremin@gmail.com Диагностика вирусных инфекций, а также определение токсичных веществ является одной из актуальных задач во многих областях жизнедеятельности человека. Количество вирусных инфекций постоянно возрастает и изменяется. Токсичные вещества должны определяться для целей медицины, пищевой промышленности и охраны окружающей среды и т.д. Причем количество токсикантов и их концентрация могут варьироваться в очень широких диапазонах. Возрастание проблем связанных с заболеваниями вирусными инфекциями и отравлениями токсичными веществами приводит к необходимости применения высокопроизводительных аналитических методов. Такой массовый скрининг на многочисленные инфекции и токсиканты должен проводиться быстро, просто, дешево и при этом желательно проводиться с количественным определением веществ. Сейчас для определения этих веществ используются в основном бактериологические тесты и хроматографические методы (ГЖХ и ВЭЖХ), но эти методы имеют ряд ограничений (длительность и дороговизна) и не могут быть использованы для массового скрининга. В настоящее время для скрининга все чаще находят применение биохимические, и в частности иммунохимические методы, основанные на детекции антиген-антительного взаимодействия. Для экспрессного определения токсикантов все более широко используется метод поляризационного флуоресцентного анализа (ПФИА). Этот метод основан на конкуренции определяемого вещества и вещества, меченого флуоресцентной меткой, за центры связывания специфических антител. В отсутствии определяемого антигена в образце поляризация флюоресценции имеет максимальное значение и снижается при повышении концентрации антигена. Для диагностики вирусных инфекций в образцах крови определяют антитела, которые диагностируются с использованием флуоресцеин-меченного пептида (трейсера). Такой трейсер имеет низкое значение поляризации флуоресценции (40-80 mP, которая значительно возрастает при связывании с антителами (до 200-300 mP), что позволяет детектировать инфекционное заболевание. В качестве пептида используют или пептиды, выделенные при гидролизе поверхностных белков бактерий, или синтетические пептиды с мимикой антигенной детерминанты бактерий. Метод ПФИА прост в постановке и позволяет в течение нескольких минут провести как качественное, так и количественное определение токсикантов и бактериальных инфекций. Более детально об методе можно найти в обзорах [1-4] и в некоторых наших недавних публикациях [5-8]. Благодарности: Исследования проводятся при поддержке гранта РФФИ 12-03-92105-ЯФ_а «Разработка поляризационного флуоресцентного иммуноанализа на микрочипах для определения антибиотиков в пищевых продуктах». Список литературы: [1] D.S. Smith and S.A. Eremin. “Fluorescence polarization immunoassays and related methods for simple, high-throughput screening of small molecules”. Anal. Bioanal. Chem., 391(5), 1499-1507 (2008). [2] Проблемы Аналитической химии / Отделение химии и наук о материалах РАН. – М. : Наука, 2010. Т. 12. Биохимические методы анализа / Под ред. Б.Б.Дзантиева; Ин-т биохимии им. А.Н. Баха РАН. – 2010. – 391 с. Глава 11. С.А. Еремин. ПОЛЯРИЗАЦИОННЫЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ ИММУНОАНАЛИЗ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ. Стр.368-389. [3] Michael E. Jolley and Mohammad S. Nasir. The Use of Fluorescence Polarization Assays for the Detection of Infectious Diseases. Comb. Chem. High T. SCR., 6(3), 235-244 (2003). [4] Nielsen K, Gall D. Fluorescence polarization assay for the diagnosis of brucellosis: a review. J Immunoassay Immunochem., 22(3), 183-201 (2001). [5] Zhen-Lin Xu, Qiang Wang, Hong-Tao Lei, Sergei A. Eremin, Yu-Dong Shen, Hong Wang, Ross C. Beier, Jin-Yi Yang, Ksenia A. Maksimova, Yuan-Ming Sun. A simple, rapid and high-throughput fluorescence polarization immunoassay for simultaneous detection of organophosphorus pesticides in vegetable and environmental water samples. Anal. Chim. Acta, 708(1-2), 123-129 (2011). [6] Н. В. Гасилова, С. А. Еремин. Разработка поляризационного флуоресцентного иммуноанализа хлорамфеникола в молоке. Журн. Аналит. Химии. 65(3), 261-265 (2010). [7] А.П. Бондаренко и С.А. Еремин. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКОТОКСИНОВ ЗЕАРАЛЕНОНА И ОХРАТОКСИНА А В ЗЕРНЕ МЕТОДОМ ПОЛЯРИЗАЦИОННОГО ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО ИММУНОАНАЛИЗА. ЖУРНАЛ АНАЛИТИЧЕСКОЙ ХИМИИ, 2012, том 67, № 9, с. 878-883. [8] Michael E. Jolley, Mohammad S. Nasir, Om P. Surujballi, Anna Romanowska, Tomas B. Renteria, Alfonso De la Mora, Ailam Lim, Steven R. Bolin, Anita L. Michel, Miladin Kostovic, Edward C. Corrigan. Fluorescence polarization assay for the detection of antibodies to Mycobacterium bovis in bovine sera. Veterinary Microbiology, 120, 2007, 113-121.