ИСТИНА

Для обнаружения повреждений ДНК, наносящих ущерб целостности генома, и для координации процессов репарации ДНК, в эукариотической клетке существует сложная сигнальная сеть, которая в первую очередь регулируется киназами семейства PI3K: ATM, ATR и DNA-PK, а также поли(АДФ-рибоза)полимеразами. Многие вирусы вызывают повреждения ДНК в клетках-хозяевах, и эти повреждения чаще всего устраняются клеточными системами репарации. Разработка подходов, позволяющих нарушить репарацию повреждений, вызываемых вирусами, но при этом не влияющих на репарацию «обычных» повреждений клеточного генома, является крайне перспективной и актуальной задачей. Одним из важнейших этапов репликации ретровирусов, к числу которых относится ВИЧ-1, является интеграция вирусной ДНК в геном клетки, осуществляемая вирусным ферментом интегразой. Встраивание обоих концов ДНК ВИЧ-1 в комплементарные цепи клеточной ДНК на расстоянии пяти пар нуклеотидов друг от друга приводит к возникновению в геноме одноцепочечных 5-ти нуклеотидных брешей, фланкирующих интегрированную ДНК вируса, а также неспаренных динуклеотидов на 5’-концах вирусной ДНК. Эти серьезные повреждения требуют незамедлительного восстановления, поскольку клетки с такими повреждениями клеточной ДНК могут быть элиминированы путем апоптоза, и это негативно скажется на развитии вирусной инфекции. Мы проанализировали участие ATM, ATR и DNA-PK в постинтеграционной репарации и обнаружили, что ингибирование DNA-PK и ATM, но не ATR, значительно снижает ее эффективность. Это довольно неожиданный результат, учитывая, что обе киназы являются сенсорами двухцепочечных разрывов, которые не образуются при интеграции. Установлено, что DNA-PK привлекается к сайтам интеграции благодаря связыванию своей субъединицы Ku70 с интегразой ВИЧ-1, и нарушение этого связывания нарушает репликацию вируса. Исследование структуры сайта связывания интегразы и Ku70 позволило определить аминокислотные остатки, ответственные за взаимодействие этих белков. С помощью молекулярного докинга базы из 50000 низкомолекулярных соединений в участок связывания интегразы в составе Ku70 удалось найти ингибиторы белок-белкового взаимодействия. Наиболее эффективный ингибитор способен подавлять трансдукцию клеток репликативно- некомпетентным вектором на основе ВИЧ-1 в микромолярных концентрациях, не влияя при этом на репарацию двуцепочечных разрывов в ДНК под действием DNA-PK. Несомненно, требуется дальнейшая оптимизация структуры ингибитора, но тем не менее можно говорить о создании нового подхода к подавлению ВИЧ-1 путем блокирования постинтеграционной репарации.