ИСТИНА

Введение. IGFBP-4, белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста (IGF), содержится в плазме крови и регулирует доступность IGF для клеточного рецептора. Расщепление IGFBР-4 по специфическому участку металлопротеазой РАРР-А приводит к образованию свободной (активной) формы IGF и протеолитических фрагментов IGFBP-4 (NT-IGFBP-4 1-135 и CT-IGFBP-4 136-237, 14,6 и 11,3 кДа соответственно). Повышение концентрации NT-IGFBP-4 и CT-IGFBP-4 в плазме крови свидетельствует о риске осложнения сердечно-сосудистых заболеваний. Часть циркулирующего в кровотоке IGFBP-4 гликозилирована по остатку Asn104, вблизи участка специфического расщепления белка протеазой РАРР-А. Целью работы было исследование влияния гликозилирования IGFBP-4 на его протеолиз под действием РАРР-А и образование фрагментов NT-IGFBP-41-135 и CT-IGFBP-4136-237. Методы. Очищенные препараты IGFBP-4 и NT-IGFBP-4 получали из ЭДТА-плазмы здоровых доноров методом аффинной хроматографии. Разделение гликозилированных и негликозилированных форм проводили на носителе с иммобилизованным конканавалином-А. Идентичность выделенных гликозилированного и негликозилированного NT-IGFBP-4 подтверждали методом масс-спектрометрии. Концентрацию IGFBP-4 и его фрагментов в образцах измеряли методом флуороиммунного анализа (ФИА) сэндвич-типа. Интенсивность РАРР-А зависимого протеолиза гликозилированного и негликозилированного IGFBP-4 in vitro оценивали, измеряя скорость образования NT-IGFBP-4 1-135 и CT-IGFBP-4 136-237. Содержание гликозилированных форм IGFBP-4 в плазме рассчитывали с использованием метода иммуноблоттинга. Результаты. Из ЭДТА-плазмы были выделены препараты гликозилированных и негликозилированных форм IGFBP-4 и NT-IGFBP-4. Полученные белки проявляют сходную иммунореактивность при их детекции с использованием специфических МАт. РАРР-А зависимый протеолиз гликозилированного IGFBP-4 идет в 3-4 раза медленнее, чем протеолиз негликозилированного белка. Доля гликозилированного NT-IGFBP-4 в общем количестве NT-IGFBP-4 составляет в среднем около 20%, что ниже доли гликозилированного IGFBP-4 в общем количестве IGFBP-4 (более 50%). Выводы. Таким образом, в плазме крови было подтверждено наличие гликозилированного IGFBP-4 и впервые детектирован и выделен гликозилированный NT-IGFBP-4. Гликозилированные IGFBP-4 и NT-IGFBP-4 обладают иммунореактивностью, сходной с иммунореактивностью негликозилированных форм. Гликозилированная форма IGFBP-4 является более устойчивой к протеолизу под действием РАРР-А.