ИСТИНА

В культивируемых животных клетках микротрубочки в большинстве случаев образуют радиальную систему с единым центром их организации (ЦОМТ), представленным центросомой. В некоторых случаях в качестве дополнительного ЦОМТа могут выступать мембраны аппарата Гольджи (АГ). При исследовании двух клеточных линий эпителия почки зелёной мартышки, Vero и BS-C-1, оказалось, что для клеток BS-C-1 АГ является более значимым ЦОМТом, чем центросома, а для клеток Vero – менее значимым. Это было показано как на интактных клетках, так и при различных воздействиях, нарушающих функции центросомы или АГ: разрушение АГ приводило к более выраженным нарушениям микротрубочек в клетках BS-C-1, чем Vero. Разрушение центросомной системы микротрубочек, достигаемое путём экспрессии доминантно-негативной формы киназы LOSK/SLK (LOSK-K63R∆T), которая в норме участвует в поддержании радиальной системы микротрубочек на центросоме, приводило к хаотизации системы микротрубочек в клетках Vero, хотя слабо влияло на клетки BS-C-1. Сравнительный анализ экспрессии белков, участвующих в организации микротрубочек на АГ, показал, что различие может быть опосредовано повышенной экспрессией белка CLASP2 в клетках BS-C-1. Однако оверэкспрессия CLASP2 в клетках Vero не способствовала повышению активности АГ как организатора микротрубочек. Экзогенный белок локализовался преимущественно на микротрубочках, нарушая их радиальную систему, что могло означать недостаточное его фосфорилирование протеинкиназами, одной из которых, по литературным данным, является GSK-3β. Действительно, оказалось, что клетки BS-C-1 имели повышенный уровень активности киназы GSK-3β по сравнению с Vero. Ингибирование данной киназы в клетках BS-C-1 привело к утрате способности АГ служить основным ЦОМТом. Далее мы решили сравнить везикулярный транспорт в клетках Vero с радиальными и хаотизированными микротрубочками. Для этого мы прослеживали за движением везикул ERGIC, маркированных при помощи конструкции ERGIC53-GFP, в контрольных клетках и в клетках, экспрессирующих LOSK-K63R∆T. Оказалось, что мгновенная скорость везикул, измеряемая как их среднее смещение за одну секунду, оставалась неизменной. Таким же, как и в контрольных клетках, сохранялся характер распределения движения везикул по их скоростям. Однако везикулярный транспорт на длинные дистанции был нарушен: скорость сборки компартмента ERGIC после его диспергирования Брефелдином А была заметно снижена по сравнению с контролем. Такой эффект является, по-видимому, результатом нарушения радиальной системы микротрубочек, что не позволяет клетке также эффективно осуществлять транспорт и поддерживать поляризованность. Таким образом, не имея прямого эффекта на внутриклеточную подвижность, протеинкиназа LOSK/SLK, тем не менее, оказывает влияние на внутриклеточный транспорт за счёт обеспечения радиального расположения микротрубочек.