ИСТИНА

Введение. Обогащение популяции натуральных киллеров (НК) для адоптивной иммунотерапии онкологических заболеваний возможно либо с помощью предварительного разделения клеточных популяций, либо путем длительного культивирования. Как обогащение в культуре, так и разделение популяций требуют схожих этапов культивирования в присутствии стимуляторов и интерлейкинов. В данной работе мы провели обогащение НК в первичной культуре лимфоцитов без разделения популяций. Материалы и методы. Использовали мононуклеарные клеткаи (МНК) периферической крови доноров. Культивирование: среда Игла МЕМ (ПанЭко), FBS (HyClone), ИЛ-2 и -15 (CSI-STORE). Стимуляции пролиферации: антитела к CD3 и CD28 (Abcam) или L-фитогемагглютинин (ФГА) (Sigma). Цитотоксичность (ЦТ) определяли на культурах-мишенях SKOV3 и mel-IL. Проточную цитометрию проводили с помощью моноклональных антител к следующим маркерам: CD3, CD56, CD16, NKG2D, NKp30, NKp80 (BD Biosciences), пропидиум йодид (BD Biosciences). Результаты. При стимуляции как антителами, так и ФГА мы получили популяцию, экспрессирующую маркер NKG2D на 80-95% всех клеток, однако, на поздних сроках инкубации популяция обладала крайне низкой цитотоксичностью. К 21 дню культивирования с использованием антител доля CD56-позитивных клеток достигала 47%, однако, практически все из них (45%) являлись НКТ-клетками (CD3+CD56+). При стимулировании ФГА доля CD56+ клеток была примерно 30%, из которых 4% — это CD3-CD56+ клетки. Заключение. Таким образом, согласно нашим данным и аналогичным исследованиям, при культивировании суммарных МНК происходит обогащение популяции NKG2D+ НКТ-клеток, обладающих высоким противоопухолевым потенциалом.