ИСТИНА

Введение: Селективная доставка лекарств в теле исследуется многими научными коллективами по всему миру. Одними из многообещающих наноконтейнеров являются наногели – мягкие наночастицы, состоящие из гидрофильных или амфифильных полимерных цепей. Наногели обладают рядом преимуществ: высокая ёмкость загрузки, стабильность и чувствительность к изменениям окружающей среды (pH, ионная сила и температура). Также мы можем использовать наногели с биодеградируемыми сшивками для того, чтобы избежать их накопления в организме. Цель исследования: Целью данной работы является синтез полимерных наноконтейнеров с использованием биодеградируемых и стабильных сшивок, а также изучение цитотоксичности и интернализации наноконтейнерной формы доксорубицина. Материалы и методы: Наногели были синтезированы на основе полиэтиленгликоль-б-полиметакриловой кислоты (ПЭГ-б-ПМА). Синтез состоял из следующих этапов: 1) формирование полиэлектролитных комплексов полимера с противоионами кальция; 2) сшивка ядра сформированной наночастицы с помощью этилендиамина и карбодиимида; 3) удаление ионов Са2+ из наночастиц путем хелатирования с ЭДТА и тщательного диализа. Для синтеза биодеградируемых наногелей на втором этапе вместо этилендиамина былиспользован цистамин. В качестве разрушающего агента использовали глутатион. Загрузку лекарственного препарата в наногели осуществляли смешиванием водных растворов веществ при различных мольных соотношениях (25°С, 10 ч). Полученные загруженные наноконтейнеры очищали от свободного лекарства путем центрифугирования на фильтрах (поры мембраны 30 кДа). Концентрацию загруженного препарата определили путём спектрофотометрического анализа. Кинетика высвобождения доксорубицина из наноконтейнеров была изучена при рН 7,4 и 5,4. Для определения размера и -потенциала наногелей был использован метод динамического светорассеяния. Была оценена цитотоксичность препаратов с помощью MTT тестана культуре клеток глиомы C6. Также с помощью конфокальной микроскопии было проведено исследование интернализации флюоресцентно-меченых наноконтейнеров. Результаты: Были получены стабильные негативно заряженные наночастицы со сшитым ядром. Было установлено, что размер и -потенциал наноконтейнеров изменяется после загрузки лекарства. Найдено, что после добавления глутатиона высвобождение происходит в 2 раза эффективнее. Также был изучен процесс высвобождения при разном рН (5,4 и 7,4) и при более низком значении высвобождение также протекает в 2 раза более эффективно. При сравнении цитотоксичности было установлено, что биодеградируемые наноконтейнеры с лекарственным препаратом обладают большей токсичностью, чем загруженные небиодеградируемые частицы. Анализ интернализации показал активное накопление флюоресцентно меченых образцов в клетках глиомы C6. Выводы: : Из полученных результатов можно сделать следующие выводы: при добавлении восстанавливающих агентов происходит разрушение биодеградируемых наноконтейнеров с цистаминовыми сшивками; высвобождение препарата из биодеградируемых наноконтейнеров, главным образом, зависит от присутствия в среде восстанавливающих агентов, а также от значения pH; повышение цитотоксичности биодеградируемых наноконтейнеров с доксорубицином в сравнении с небиодеградируемыми частицами предположительно связано с разрушением контейнера при его попадании в клетки, где уровень содержания глутатиона повышен; на основании анализа интернализации наноконтейнеров можно утверждать, что через 20 минут после инкубации происходит более активное накопление биодеградируемых наноконтейнеров. Работа выполнена при поддержке гранта РНФ 14-15-00698.