ИСТИНА

Флуоресцентный зонд бромистый этидий (БЭ) широко используется для идентификации нативной двуспиральной структуры молекулы ДНК в водных растворах. При интеркаляции катионов этидия между парами оснований двухспиральной молекулы ДНК наблюдается резкое возгорание флуоресценции. Напротив, вытеснение БЭ из спирали ДНК при ее взаимодействии с поликатионами различной природы, приводит к тушению флуоресценции. Этот подход применен для изучения образования и свойств комплексов ДНК с различными линейными и разветвленными синтетическими полиаминами, основными пептидами и гистонами, дендримерами и поверхностно-активными веществами в водно-солевых растворах. Электростатическое взаимодействие ДНК, меченной бромистым этидием, с указанными партнерами сопровождается вытеснением БЭ из ДНК и уменьшением интенсивности флуоресценции. По форме и положению кривых флуориметрического титрования возможно судить о кооперативности связывания поликатионов с ДНК и определять параметры этого взаимодействия, например, критическую концентрацию мицеллообразования ПАВ на матрице ДНК. Введение в растворы поликомплексов низкомолекулярного электролита приводит к разрушению солевых связей и разрушению комплексов. Процесс диссоциации сопровождается встраиванием этидия в освобождающиеся участки двойной спирали ДНК и увеличением интенсивности флуоресценции. Из анализа полученных данных были сделаны выводы о влиянии на устойчивость ДНК-содержащих поликомплексов таких факторов, как природа и концентрация низкомолекулярной соли, рН раствора, степень полимеризации поликатиона, природа аминогрупп, а также структура N-алкильных заместителей и степень алкилирования четвертичных полиаминов. Таким образом, измерение интенсивности флуоресценции бромистого этидия является простым, чувствительным и информативным методом изучения комплексообразования ДНК с различными поликатионами. В настоящее время описанный подход используется при исследовании взаимодействия ДНК с полиамфолитами и полибетаинами.