ИСТИНА

В состав гемопротеинов входят белковая часть и гемовая группа. К гемопротеинам относятся гемоглобин и его производные, миоглобин, хлорофиллсодержащие белки, а также ферменты (различные монооксигеназы, пероксидазы и каталазы). В составе ферментов гемовая группа является кофактором, так как её наличие строго необходимо для катализа ферментативных реакций. Гем располагается в активном центре либо в непосредственной близости от него. Гем-связывающие сайты представляют собой гидрофобные карманы, образованные разными структурными единицами: альфа- и бета-спиралями, белковыми доменами. К гемопротеинам относится, в частности, фермент простагландин-H-синтаза (PGHS), катализирующий превращение арахидоновой кислоты в простагландин H2 (PGH2). Катализ проходит в два этапа: циклооксигеназная реакция, в ходе которой арахидоновая кислота, соединяясь с двумя молекулами кислорода, превращается в простагландин G2 (PGG2), и пероксидазная реакция, в результате которой PGG2 преобразуется в PGH2. Для осуществления обеих реакций необходимо наличие гемина (соединения, являющегося производным от гемоглобина) в составе фермента. Целью данной работы являлось исследование механизма взаимодействия фермента с гемином, в частности, определение равновесной константы диссоциации холоформы PGHS (комплекса фермент-гемин), а также элементарных констант скоростей образования и распада холоформы. Для анализа системы PGHS-гемин была использована равновесная модель. Из экспериментальных данных было установлено, что во всём исследуемом диапазоне концентраций фермента время образования холоформы (в случае добавления значительного избытка экзогенного гемина) меньше 0,9 сек. В отсутствие экзогенного гемина процесс распада холоформы фермента в реакционной ячейке зависит от концентрации фермента: если при малых концентрациях количество холоформы в ячейке практически не уменьшается за первую минуту протекания реакции, то при высоких концентрациях количество холоформы уменьшается за то же время на 15-20%. После сопоставления экспериментальных данных и теории были оценены элементарные константы: константа образования холоформы ≥ 107 М-1*сек-1, а константа распада ~ 10-2 сек-1. Равновесная константа диссоциации комплекса ≤ 1 нМ.