ИСТИНА

Определение токсичных веществ является одной из актуальных задач во многих областях жизнедеятельности человека. Токсичные вещества должны определяться для целей медицины, пищевой промышленности и охраны окружающей среды. Причем в многочисленных образцах количество токсикантов и их концентрация могут варьироваться в очень широких диапазонах от практически нулевых до мг/мл (г/кг). В связи с этим остро необходимы высокопроизводительные аналитические методы. Такой массовый мониторинг и скрининг на многочисленные токсичные вещества должен проводиться быстро, просто, дешево и при этом желательно проводиться с количественным определением одного или нескольких веществ. Сейчас для определения токсикантов используются в основном хроматографические методы (ГЖХ и ВЭЖХ), но эти методы имеют ряд ограничений (длительность и дороговизна) и не могут быть использованы для массового скрининга. В настоящее время для скрининга все больше находят применение биохимические, и в частности иммунохимические методы, основанные на использовании антител как специфических распознающих биореагентов. Наряду с хорошо распространенным ИммуноФерментным Анализом (ИФА), все более широкое применение находит метод Поляризационного Флуоресцентного ИммуноАнализа (ПФИА). Метод ПФИА заключается в конкуренции определяемого токсичного вещества и вещества меченного флуоресцентной меткой (трейсера) за связывание с ограниченным количеством антител. Метод основан на измерении возрастании поляризации флуоресценции трейсера при его специфическом связывании с антителами в зависимости от концентрации токсиканта. Метод ПФИА довольно прост в постановке и заключается в добавлении аликвоты определяемого вещества (обычно 10-50 мкл) и трейсера к раствору антител, инкубации в течение нескольких минут и измерении поляризации флуоресценции. Общее время анализа не превышает нескольких минут. Еще одним из достоинств ПФИА является его высокая воспроизводимость и производительность, так как к минимуму сведены этапы проведения анализа и исключены ошибки при добавлении реагентов. Более того, метод ПФИА позволяет проводить количественные определения по градуировочному графику, который стабилен и нет необходимости каждый раз проводить калибровку, как в методе ИФА. Метод ПФИА может быть использован для определения в основном низкомолекулярных соединений и чувствительность метода ПФИА на 1-2 порядка ниже, чем в методе ИФА с использованием одних и тех же антител. Еще одним ограничением метода ПФИА является более высокая зависимость от матрикса образца, чем в методе ИФА, в котором включены несколько стадий промывки и удаления маскирующих веществ. До последнего времени были малодоступны поляризационные флуориметры - приборы для проведения ПФИА. Однако сейчас все больше новых приборов производится, и их стоимость значительно снижена. Так портативные поляризационные флуориметры Сентри-200 стоят около 5000 долларов США, что на 1-2 порядка ниже, чем стоимость хроматографов. В докладе будут рассмотрены последние достижения по разработке новых методик ПФИА для определения токсичных веществ с использованием поликлональных и моноклональных антител. Более детально о определении токсикантов методом ПФИА можно найти в наших обзорах и недавних публикациях.