ИСТИНА

Нарушения гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) при различных заболеваниях могут быть связаны с воздействием активных форм кислорода (АФК). Пероксид водорода (Н2О2) является одним из основных видов АФК, который может функционировать как сигнальная молекула, а также как повреждающий агент. В данной работе исследовали влияние экзогенного и эндогенного Н2О2, а также прооксидативного цитокина интерлейкина 17А (IL17A) на функционирование гематоэнцефалического барьера. Для детекции Н2О2 использовали генетически кодируемый сенсор HyPer7, а для генерации эндогенного Н2О2 использовали хемогенетический генератор оксидазу D аминокислот (DAAO). Мы показали, что добавление интерлейкина 17А ведет к генерации Н2О2 в эндотелиоцитах ГЭБ путем активации НАДФН-оксидазы. При ингибировании НАДФН-оксидазы ингибитором DPI генерация Н2О2 в эндотелиоцитах в ответ на IL17A не наблюдалась. Генерация Н2О2 в ответ на IL17A, а также генерация эндогенного Н2О2 и добавление экзогенного Н2О2 вызывает ремоделирование актинового цитоскелета в эндотелиоцитах, что ведет к нарушению эндотелиального монослоя и снижению его барьерных свойств. Коэффициент проницаемости моделей ГЭБ при добавлении экзогенного 10 мкМ Н2О2 увеличивается на 40 %, при добавлении 100 нг/мл IL17A увеличивается на 23 %, а при хемогенетической генерации эндогенного Н2О2 – на 12 %. При блокировании ремоделирования цитоскелета ингибитором киназы легких цепей миозина ML7 не удается обнаружить статистически значимых отличий в проницаемости моделей ГЭБ до и после добавления IL17A и 10 мкМ Н2О2, а также при хемогенетической генерации пероксида водорода. Таким образом, ингибирование киназы легких цепей миозина нейтрализует эффект на изменение формы эндотелиоцитов и на проницаемость ГЭБ. Ингибирование НАДФН-оксидазы путем добавления DPI также нейтрализует эффект от IL17A на коэффициент проницаемости. Таким образом, редокс-зависимое ремоделирование актинового цитоскелета эндотелиоцитов является одним из механизмов увеличения проницаемости ГЭБ.Данное исследование показало, что Н2О2и прооксидативный цитокин IL17A могут вызывать нарушения ГЭБ путем ремоделирования актинового цитоскелета эндотелиоцитов. Нейтрализация этих эффектов может быть достигнута ингибированием НАДФН-оксидазы и киназы легких цепей миозина. Эти результаты могут иметь важное значение для разработки новых методов лечения заболеваний, связанных с нарушением ГЭБ.