ИСТИНА

НК имеют ряд преимуществ по сравнению с Т-лимфоцитами в контексте использования их в качестве противоопухолевых эффекторов, так как могут быть использованы без сложных генетических манипуляций по удалению Т-клеточного рецептора в аллогенном варианте, не вызывают выраженного синдрома высвобождения цитокинов и обладают мощной естественной цитототоксичностью в отношении злокачественно трансформированных клеток. Однако по сей день экспансия и генетические модификации НК достаточно затруднительны, что замедляет их продвижение в качестве противоопухолевого биомедицинского клеточного продукта (БМКП). Причем, информация о том, как можно было бы индуцировать активную пролиферацию НК существенна не только для получения значительного количества клеток для терапии, но и для их генетической модификации, так как по многочисленным сведениям легче всего подвергаются вирусной трансдукции именно активно делящиеся лимфоциты, даже если вирус обладает способностью инфицировать неделящиеся клетки. Пока не известны компоненты НК, через взаимодействие с которыми антител можно было бы индуцировать их пролиферацию, как это происходит при взаимодействие CD3 со специфическими антителами. В литературе описаны методы экспансии НК в присутствии цитокинов: ИЛ-2,-15, -18, -21, однако сообщается об их недостаточной эффективности. В настоящий момент для иммунотерапии рака преимущественно используются Т-лимфоциты. Во многом это определяется тем, что существуют несложные, достаточно эффективные, надежные, хорошо разработанные методы их экспансии ex vivo и стабильной генетической модификации преимущественно ленти- и ретровирусами. Активная пролиферация Т-лимфоцитов обычно запускается при взаимодействии специфических антител или Т-клеточных митогенов (фитогемагглютинин, конканавалин А) с компонентами Т-клеточного рецептора (CD3) и ко-рецепторов (CD28). Для понимания биологической активности НК и развития способов их экспансии существенно недавнее открытие, что НК обладают свойствами аналогичными лимфоцитам адаптивного иммунитета, а именно активно делиться в ответ на определенные лиганды клеточного стресса и образовывать клетки памяти в ответ на вирусные инфекции. Механизм экспансии адаптивных НК чем-то напоминает примирование наивных Т-клеток, но использует другие рецепторы. Детали процесса активации и пролиферации адаптивных НК, рецепторы и лиганды, участвующие в нем, еще только выясняются. В литературе описаны методы экспансии НК ex vivo в присутствии облученных, или обработанных митомицином C фидерных иммортализованных клеточных линий или облученных аутологичных мононуклеарных клеток периферической крови (МНК), экспрессирующих стресс-лиганды, которые взаимодействуют с активационными рецепторами на поверхности НК. По сообщениям большинства работ НК достаточно тяжело подвергаются вирусной трансдукции, поэтому исследователи все еще разрабатывают данную методологию и тестируют многообразные подходы для стабильной генетической модификации этой привлекательной для противоопухолевой терапии популяции лимфоцитов. Однако авторы некоторых работ уже сообщают о значительном успехе в этом деле. Среди особенностей их методологий следует отметить, что для трансдукции были использованы активно пролиферирующие НК. Для экспансии НК можно использовать трансгенную линия К562 с экспрессией мембраносвязанной формы ИЛ-15 и дополнительно костимулирующей молекулы Т-клеток и НК 4-1ВВ (4-1BBL). Для успешной трансдукции используют псевдотипирование ретровирусов белками RD114 и BaEV. Кроме того, для улучшения трансдукции могут быть использованы ингибиторы сигнальных путей рецепторов врожденного иммунитета. В итоге, в настоящее время наиболее эффективными методами экспансии НК считаются разнообразные системы на основе фидерных клеток, причем пока доминируют трансгенные опухолевые линии, экспрессирующие стимулирующие НК факторы (4-1B-BL, ИЛ-15, -21). Однако наметился вариант усовершенствования данных систем с отказом от использования опухолевых линий. Для трансдукции преимущественно используются ленти- и другие ретровирусные векторы, но эффективность в большинстве работ недостаточно высока. Для увеличения эффективности трансдукции пытаются использовать различные энхансеры, подавлять естественную резистентность НК к вирусной инфекции, псевдотипировать вирусную оболочку для улучшения взаимодействия с рецепторами НК.