ИСТИНА

Одним из методов лечения онкологических заболеваний является химиотерапия. При этом существует проблема выживания части опухолевых клеток. Терапия-индуцированное старение (ТИС) является одной из форм сохранения жизнеспособности. В последние годы показано, что ТИС может носить обратимый характер. При возобновлении пролиферации возникает популяция клеток, обладающих новыми свойствами. Характеристика клеток в состоянии ТИС и поиск препаратов, препятствующих переходу клеток в ТИС является актуальными. В работе проведено исследование комбинированного воздействия доксорубицина (Дох, 0,25 мкМ, 48 ч) и антиоксиданта альфа-липоевой кислоты (ЛА, 200 мкМ, 48 ч) на клетки эпидермоидной карциномы человека А431. Воздействие Дох вызывало падение метаболической активности (МА) (МТТ-тест) на 30±3%, которое продолжалось после удаления Дох (3 сут, 50±5%) . На 7 сут МА частично восстанавливалось (84±11%). Воздействие ЛА вызывало уменьшение МА на 18±4%. Воздействие Дох+ЛА усиливало падение МА до 39±1,5%. Клетки при воздействии Дох, Дох+ЛА и после удаления агентов демонстрировали признаки старения: наличие β-галактозидазы, увеличение плоидности (по интенсивности флуоресценции DAPI в программе Fiji). Увеличение плоидности наиболее выражено при воздействии Дох+ЛА. Прижизненные исследования показали, что увеличение плоидности в большинстве клеток опосредуется эндоредупликацией. Электронно-микроскопическое исследование продемострировало, что в контроле ядра клеток содержали незначительное количество гетерохроматина. В ядрышках выявлялись фибриллярные центры, плотный и гранулярный компоненты. В дальнейшем строение ядрышек, сходное с контролем считалось показателем жизнеспособности клеток. При воздействии Дох и Дох+ЛА ультраструктура ядер не изменялась; при удалении агентов содержание гетерохроматина уменьшалось. В присутствии Дох, Дох+ЛА и после удаления агентов в ядрах клеток встречались участки гетерохроматина диаметром от 0,1 до 0,5 мкм, предположительно относящиеся к гетерохроматиновыми комплексами, ассоциированными со старением. Воздействие Дох и Дох+ЛА вызывало образование микроядер. Большинство микроядер имели структуру, сходную с основным ядром. В некоторых микроядрах наблюдались признаки деградации (нарушение целостности ядерной оболочки, отсутствие гетерохроматина). Т.к ЛА является антиоксидантом, была проанализирована ультраструктура митохондрий как главного источника АФК. Воздействие Дох, ЛА и Докс+ЛА вызывало уменьшение числа крист. При удалении агентов ультраструктура митохондрий частично восстанавливалась. Морфометрический анализ в программе Fiji показал, что в контроле митохондрии со светлым матриксом составляли 7% в популяции; митохондрии с темным матриксом － 36%. В присутствии ЛА 72% митохондрий содержали светлый матрикс, в присутствии Дох и Дох+ЛА － 59 и 52% соответственно. При удалении агентов происходило возрастание доли митохондрий с более темным матриксом (31%); при этом сохранялось высокое содержание митохондрий со светлым матриксом (31%). Таким образом совместное воздействие Дох и ЛА на клетки эпидермоидной карциномы человека А431 усиливало гибель клеток, не препятствовало переходу клеток в состояние ТИС, изменяло строение митохондрий. При удалении агентов сохранялись признаки ТИС, происходило частичное восстановление митохондрий. Работа выполнена при финансовой поддержке НИР 121032300098-5