ИСТИНА

На сегодняшний день амперометрический фенольный сенсор на основе тирозиназы является одной из перспективных и социально востребованных биоаналитических систем. Высокая чувствительность и экспрессность анализа фенола позволяет определять активности ферментов, использующих производные фенола в качестве субстратов, в сильно разбавленных образцах биологических жидкостей при минимальной интерференции. Целью данного исследования была разработка методик измерения активностей нагазы и параоксоназы в биологических жидкостях с использованием планарного графитового биосенсора на основе тирозиназы, созданного методом послойного нанесения полиэлектролитов. Тирозиназный биосенсор создавали путем последовательной адсорбции (метод слой-за-слоем) поли(диметилдиаллиламмоний хлорида) и тирозиназы на поверхность планарного графитового электрода, формируемого методом трафаретной печати. Тирозиназный биосенсор имел следующие аналитические характеристики: линейный диапазон 1Е-08 M – 1Е-05 M; операционная стабильность: 0,6% снижения отклика за одно измерение; предел детекции по фенолу 12 нМ, чувствительность 0,44 А/(М∙см2). Достигнутый уровень чувствительности по фенолу позволил применить разработанный сенсор для анализа ферментов в биологических жидкостях. Проблема диагностики субклинического мастита коров заключается в определении в молоке низких концентраций одного из маркеров заболевания - нагазы. Чувствительный метод определения нагазы позволит диагностировать мастит на ранней стадии, что является залогом его успешного лечения. Проведена адаптация рассматриваемой биоаналитической системы по детекции фенола в присутствии молока. Чувствительность определения нагазы по субстрату фенил-N-ацетил-β-D-гюкозаминиду в модельных средах и в присутствии молока составила 14 нА/(мЕд./мл∙см2) и 72 нА/(мЕд./мл∙см2). В связи с широким применением фосфорорганических соединений большое значение приобрело определение активности параоксоназы в крови человека, функция которой состоит в детоксикации ФОС, попадающих в организм. Кроме того, параоксоназа является маркером атеросклероза, других заболеваний сердца, а также патологических состояний печени. Поставлена методика для дифференциального ингибиторного анализа активности параоксоназы в сильно разбавленных гемолизатах крови с использованием фенилацетата в качестве субстрата. Проведена верификация со спектрофотометрическим методом.