ИСТИНА

Широкое использование токсических фосфорорганических соединений (ФОС) в промышленности и сельском хозяйстве делает проблему их определения и мониторинга исключительно актуальной. Некоторые индуцируют так называемую отставленную нейропатию, которая связана с их способностью ингибировать одну из эстераз нервной ткани (нейротоксичную эстеразу, НТЭ). Анализ ингибирующей способности ФОС по отношению к данному ферменту-мишени позволяет оценить нейропатический потенциал соединения. Традиционное использования с этой целью препаратов НТЭ из свежевыделенного мозга кур затрудняет токсилогические исследования. В связи с этим перспективным направлением в области аналитических методов, позволяющих быстро оценить нейропатический потенциал ФОС, является создание биосенсоров, содержащих иммобилизованную НТЭ. Использование таких методов требует стабильного препарата фермента. Недавно нашими коллегами были получены стабильные лиофилизованные препараты НТЭ. Целью данной работы является получение их кинетических характеристик. Для изучения фермент и субстратного взаимодействия исследовалась кинетика гтдролиза фенилвалерата препаратом лиофилизованной НТЭ. Фенилвалерат в присутствии НТЭ гидролизуется до валериановой кислоты и фенола, который определяли спектрофотометрически по качественной реакции с 4-аминоантипирином и ферроцианидом калия. Кинетику ингибирования изучали при использовании классического отставленного ингибитора - мипафокса. В результате проделанной работы были определены основные кинетические параметры нового лиофилизованного препарата нейротоксичной эстеразы. Константа Михаэлиса и константа скорости второго порядка ингибирования составили 1 мМ и 2,6Е+03 1/(М мин), соответственно. Кинетические параметры лиофилизованной НТЭ сопоставимы с соответствующими параметрами свежевыделенного фермента. Таким образом, охарактеризованный нами препарат НТЭ может быть предложен в качестве чувствительных элементов биосенсоров для оценки нейротоксических свойств ФОС.