ИСТИНА

Bgl2p – мажорный белок клеточной стенки дрожжей cо свойствами амилолида – устойчив к обработке детергентами и протеиназами, способен образовывать фибриллы. Условия формирования амилоидов клеточной поверхности низших эукариот малоизученны. Существует гипотеза о возможном влиянии полианионов (например, неорганические полифосфаты) на процесс амилоидообразования. Для проверки этой гипотезы и получения ответа на вопрос, стимулируют или ингибируют полифосфаты процесс амилоидообразования, в качестве модели в работе использовали пептид АК187-196, соответствующий по последовательности амилоидогенному участку Bgl2p; в качестве полианионов использовали неорганические полифосфаты с длиной цепи 155. Конформационные изменения в пептиде регистрировали с помощью метода собственной флуоресценции остатков триптофана; количество амилоидных фибрилл оценивали при помощи спектроскопии с применением специфических красителей тиофлавина Т и Конго Красного; морфологию амилоидов визуализировали с помощью флуоресцентной микроскопии после окрашивания тиофлавином Т. Было обнаружено, что в отсутствие полифосфатов пептид АК187-196 в растворе образует амилоидные фибриллы, которые устойчивы к действию протеиназы K. При исследовании влияния рН среды инкубации на процесс амилоидообразования пептида было показано, что наибольшее количество амилоидных фибрилл в растворе наблюдается в диапазоне рН от 4.0 до 8.0, при этом степень контакта остатков триптофана с водой уменьшается по сравнению с кислой и щелочной областями значений рН исследованного диапазона. Продемонстрирована обратимость влияния полифосфатов на образование пептидом АК187-196 амилоидных структур. Ионная сила раствора не влияет на изучаемый процесс. Гипотеза о влиянии полифосфатов на процесс амилоидообразования подтверждена с использованием в качестве модели пептида Bgl2p АК187-196. Показано, что полифосфаты стимулируют его амилоидообразование.