ИСТИНА

Хронические воспалительные и онкологические заболевания представляют собой серьезную проблему для современной медицины. Оба процесса характеризуются неоангиогенезом в очагах патогенеза, который сопровождается повышенной экспрессией на поверхности эндотелиальных клеток αvβ3-интегрина. Вследствие этого, происходит формирование новых кровеносных сосудов, которые вносят существенный вклад в дальнейшее усиление воспаления и опухолевого роста благодаря дополнительному поступлению питательных веществ и клеток иммунной системы. Препараты для нейтрализации αvβ3-интегрина и других медиаторов воспаления и неоангиогенеза могут быть получены на основе каркасного белка 10 домена фибронектина III типа человека (10Fn3). С целью увеличения времени циркуляции в организме нами сконструированы гибриды искусственного αvβ3-интегрин-связывающего белка (IBFn3) с альбумин-связывающим доменом (ABD). Проведена оптимизация экспрессии рекомбинантных белков в клетках E. coli. Варианты с различным расположением партнеров и различной длиной линкера очищены методом Ni-аффинной хроматографии. Продемонстрировано, что увеличение длины линкера между белками-партнерами способствует лучшей растворимости гибридов и повышению уровня связывания с человеческим сывороточным альбумином (HSA). Гель-фильтрационный анализ показал, что полученные гибриды представлены в мономерной форме. Методом иммуноферментного анализа было установлено, что гибрид IBFn3-ABD лучше связывается c альбумином человека (HSA), чем ABD-IBFn3. Образование комплексов данных гибридов с HSA также продемонстрировано методами гель-фильтрационного анализа и металл-аффинной хроматографии с последующим электрофорезом. Проводится сравнение времени циркуляции полученных гибридов в кровотоке мышей, а также исследование их биораспределения по органам, для чего будет получена флуоресцентная производная. Работа проводится при поддержке программы РАН «Молекулярная и клеточная биология».