ИСТИНА

В настоящее время, когда возможности консервативных методов исчерпаны для реконструкции нефункционирующего мочевого пузыря (МП) выполняют операции по его замещению фрагментами ЖКТ, что приводит к различным осложнениям. Альтернативой данному методу может стать реконструкция МП с помощью методов тканевой инженерии. Известно об успешных попытках реконструкции МП на модели животных и у человека с использованием полученного в условиях in vitro неоцистиса [1,2]. Несмотря на положительные результаты, клинические улучшения у пациентов остаются минимальными [3]. Целью данного исследования является разработка тканеинженерной конструкции для восстановления повреждения ткани на модели парциальной резекции МП кролика. С помощью метода выщелачивания был приготовлен двухслойный скаффолд на основе смеси полимера молочной кислоты – полилактида с фиброином шелка. Размер волокон фиброина шёлка сопоставим со средним диаметром мезенхимных клеток, что способствует адгезии и распластыванию клеток на волокнах. Также структура этого слоя, и его высокая пористость способствуют миграции клеток внутри скаффолда. Полилактидный слой обладает гидрофобными свойствами и имеет также пористую структуру с системой взаимосвязанных между собой сферических пор, диаметр которых составляет 250-300 мкм. Структуру скаффолда оценивали с помощью сканирующей электронной микроскопии (рис.1). Рис.1. СЭМ скаффолда на основе полилактида и фиброина шелка. В качестве клеточной составляющей трансплантата использовали мезенхимальные стромальные клетки костного мозга (МСК). Для того чтобы проследить судьбу импланированных клеток после выведения животных из эксперимента, в МСК был введен прижизненный краситель PKH-26. Для оценки эффективности включения красителя клетками использовали метод непрямой иммунофлуоресценции, ядра клеток окрашивали DAPI (4′,6-diamidino-2-phenylindole). Идентификацию окрашенных клеток проводили с помощью конфокального микроскопа Leica TCS SL (Zeiss, Германия). Для возбуждения флуоресценции использовали аргоновый лазер с длиной волны 488 нм и HeNe –лазер с длиной волны 543 нм. Применяли раздельное сканирование для каждого сигнала. Совмещение двух сигналов проводили с помощью компьютерной программы Leica Confocal Software (рис.2)