ИСТИНА

В последнее десятилетие бурно развивается тема индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) [1]. Как и эмбриональные стволовые клетки (ЭСК), они могут дифференцироваться во все три зародышевых листка − энтодерму, мезодерму и эктодерму. При этом, ИПСК можно получить из уже дифференцированных клеток взрослого организма, в отличие от ЭСК, которые присутствуют только на ранних стадиях эмбриогенеза. Транскрипционный фактор Oct4 является маркером как ИПСК, так и ЭСК, а также незаменим при индукции плюрипотентности [2, 3]. Ген Oct4 подвержен тонкой регуляции − как повышение, так и понижение его экспрессии менее, чем на 50 %, ведет к дифференцировке плюрипотентных клеток [4]. Управление транскрипцией Oct4 происходит через проксимальный промотор (ПП), проксимальный энхансер (ПЭ) и дистальный энхансер (ДЭ). Эти последовательности метилированы при выключенном Oct4, но во время его транскрипции являются мишенями для связывания с регуляторными белками. ДЭ, необходимый для работы Oct4 во внутренней клеточной массе и в культивируемых ЭСК, содержит два ключевых элемена − сайт 2А и сайт 2Б. С последним связывается гетеродимер Oct4-Sox2, но остаются неизвестны белки, взаимодействующие с сайтом 2А (CCCCTCCCCCC)[5]. Наша работа заключается в идентификации таких белков и определении их значимости в регуляции экспрессии гена Oct4. С помощью методов гель-ретардации, аффинной хроматографии и масс-спектрометрии, нами было обнаружено, что in vitro, с последовательностью сайта 2А специфично связываются представители поли-С-связывающих белков (Poly(C)-binding proteins), такие как hnRNP-K, Pcbp1 и Pcbp2. В литературе подтверждается роль этих белков в регуляции транскрипции таких генов, как BRCA1 и μ-опиоидного рецептора [6]. На данный момент, мы работаем над подтверждением полученных результатов в экспериментах in vivo. С помощью методов иммуннопреципитации хроматина (ChIP) и генного нокаута на основе системы CRISPR-Cas9 выявляется функциональная значимость перечисленных белков в работе Oct4. Также ведутся работы по влиянию их оверэкспрессии на функционирование ЭСК и индукцию плюрипотентности. 1. Takahashi K. and S. Yamanaka. Cell, 126(4), (2006). 2. Wu G. and H.R. Scholer. Cell Regeneration, 3(7), (2014). 3. Kim J.B. et al. Cell, 136(3), (2009). 4. Niwa H., J.-I. Miyazaki and A.G. Smith. Nat. Genet., 24(4), (2000). 5. Okumura-Nakanishi S. et al. J. Biol. Chem., 280(7), (2005). 6. Choi H.S. et al. Biochem. Biophys. Res. Commun., 380(3), (2009).