![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Белковая инженерия в настоящее время является основным подходом для создания биокатализаторов для индустриальной биотехнологии и биосенсоров для анализа окружающей среды и медицинской диагностики. Все методы белковой инженерии можно разделить на методы неупорядоченного мутагенеза (направленная эволюция, геномная мозайка, мутирующие штаммы и др.), на методы, основанные на анализе белковых структур с выбором перспективных позиций и направленного введения мутаций. В данном докладе будут подробно рассмотрены достоинства и недостатки каждого из подходов и их применение на конкретных ферментах. В нашей лаборатории уже много лет проводятся исследования по инженерии ряда практически важных ферментов ‒ формиатдегидрогеназы из различных источников (метилотрофные и патогенные бактерии, дрожжи, растения), растительные пероксидазы (корни хрена, листья табака), оксидазы Д-аминокислот (дрожжи Trygonopsis variabilis, Hansenula polymorpha), пенициллинацилазы (E.coli, A.faecalis) и гидроаза эфиров альфа-аминокислот. Обсуждается вопрос выбора источника фермента. Будет показано, что рациональный дизайн более эффективен при точечных заменах и не имеет альтернативы при создании новых ферментов с вставками и делециями, а также получения одноцепочечной пенициллинацилазы без процессинга. Будут приведены примеры клонирования, экспрессии выделения, кристаллизации и определения структуры различных ферментов. Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда, грант РНФ 16-14-00043, Российского фонда фундаментальных исследований, гранты РФФИ 17-04-1469а, 17-04-01487а и 17-04-01662а.