|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Получение и характеристика мутантных форм пероксидазы хренадипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Тишков В.И., Хушпульян Д.М.
- Автор: Орлов Алексей Павлович
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2010
- Аннотация: 1. В клетках Е.coli были успешно экспрессированы, реактивированы и очищены 3 мутантных формы пероксидазы хрена - HRP Phe142Trp, HRP Phe142Tyr и HRP Phe179Tyr, а также фермент дикого типа. 2. Проведено изучение термостабильности полученных ферментов. Показано, что введение дополнительных остатков триптофана и тирозина приводит к увеличению термостабильности ферментов. В частности, мутация Phe142→Tyr приводит к увеличению стабильности в 1,5 раза. 3. Изучена субстратная специфичность наработанных мутантных препаратов пероксидазы хрена. Показано, что для всех мутантов наблюдается уменьшение активности по всем выбранным субстратам. 4. Изучена кинетика реакции окисления ABTS пероксидом водорода, катализируемой ферментом дикого типа и его мутантами. Показано, что введение аминокислотных замен приводит к уменьшению величины константы скорости взаимодействия как с пероксидом водорода ( ~1,5-1,2 раза), так и с субстратом АБТС (~ 2 раза). 5. Сравнение полученных мутантных препаратов HRP в реакции хемилюми-несцентного окисления люминола пероксидом водорода показало, что в случае мутанта HRP Phe142Tyr наблюдается 2-х кратное увеличение стабильности сигнала.
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович