|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Drosophila melanogaster как модель для изучения функции белков денсовируса рыжего таракана (BgDV1)дипломная работа (Магистр)
- Научные руководители: Ким А.И., Муха Д.В.
- Автор: Королева Мария Александровна
- Тип: Магистр
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2019
- Аннотация: В 1964 году был найден первый денсовирус – денсовирус бабочки Gallería mellonella. С этого момента прошло достаточное количество времени, однако до сих пор денсовирусы насекомых являются одной из самых мало изученных групп парвовирусов. Ученые только начинают раскрывать особенности биологии и патологии этой группы вирусов, что делает денсовирусы очень интересной и перспективной областью для исследования. Изучение денсовирусов может помочь в понимании взаимодействия вируса и его хозяина. С помощью исследования механизмов экспрессии денсовирусных генов и сплайсинга транскриптов этих генов в инфицированном организме можно понять, каким образом осуществляется эффективный синтез дочерних вирусных частиц и как клетки насекомого пытаются предотвратить этот процесс. Эти знания могут помочь в борьбе с вредоносными насекомыми путем использования денсовирусов в качестве биологического средства для борьбы с сельскохозяйственными вредителями. Денсовирус рыжего таракана, открытый в 2000 году, представляет большой интерес не только в научном, но и в практическом плане. Так, изучение формирования вирусоподобных частиц из капсидных белков VP3 денсовируса рыжего таракана в дальнейшем может позволить создавать вакцины на основе этих вирусоподобных частиц. Цель работы: Изучить экспрессию генов капсидных белков денсовируса рыжего таракана и сплайсинг транскриптов этих генов в трансгенных линиях D. melanogaster, исследовать самосборку вирусоподобных частиц в трансгенных линиях дрозофил. Задачи исследования: 1. Исследовать сплайсинг транскриптов генов капсидных белков VP1, VP2, VP3 денсовируса рыжего таракана в трансгенных линиях D. melanogaster. 2. Изучить характер сплайсинга транскрипта гена капсидного белка VP2, в котором искусственно нарушена рамка считывания капсидного белка. 3. Исследовать экспрессию капсидных белков VP1, VP2 и VP3 денсовируса рыжего таракана в трансгенных линиях D. melanogaster. 4. Методом трансмиссионной электронной микроскопии выявить вирусоподобные частицы в линиях D. melanogaster, содержащих клонированную последовательность капсидного белка VP3 денсовируса рыжего таракана. ВЫВОДЫ 1) Охарактеризован паттерн сплайс-вариантов транскриптов генов капсидных белков (VP1, VP2, VP3) денсовируса рыжего таракана в трансгенных линиях Drosophila melanogaster, активируемых транскрипционным фактором GAL4 под контролем промотора гена alphaTub84B. Показано, что в отличие от ранее описанных сплайсвариантов РНК гена VP2 (при активации экспрессии под контролем промотора гена Act5C) в проведенных нами экспериментах не наблюдалось амплифицированных фрагментов, соответствующих несплайсированному транскрипту. 2) Показано, что при активации экспрессии гена VP3 транскрипционным фактором GAL4 под контролем промотора гена alphaTub84B, также как и при активации под контролем промотора гена Act5C, в трансгенной линии D. melanogaster не происходит сплайсинга исследуемого транскрипта. Методом Вестерн-блоттинга показан синтез белкового продукта, соответствующего нативной форме белка VP3. 3) Впервые показано, что при экспрессии в трансгенных линиях D. melanogaster гена VP2, содержащего мутацию, приводящую к сдвигу рамки считывания и, соответственно, блокирующую трансляцию РНК, происходит формирование сплайсвариантов, не отличимых по размеру от сплайс-вариантов нативного гена. 4) Методом трансмиссионной электронной микроскопии в имагинальных дисках, головном ганглии и слюнных железах личинок трансгенных дрозофил проведено исследование вирусоподобных частиц (ВПЧ), формируемых за счет самосборки капсидного белка VP3. В слюнных железах выявлены структуры, предположительно соответствующие по размеру искомым ВПЧ.
- Добавил в систему: Ким Александр Иннокентьевич