|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Изучение свойств мутантных форм катепсина L Tribolium castaneumдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Филиппова Ю.И., Элпидина Е.Н.
- Автор: Симонян Т.Р.,
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2019
- Аннотация: Предложен простой способ получения рекомбинантных препаратов прокатепсина L T. castaneum (TcProcathL WT) и его мутантных форм – TcProcathL V277T, TcProcathL V277D, TcProcathL V277I, TcProcathL V277A, TcProcathL V277Y – из культуральной жидкости высаливанием сульфатом аммония с последующим диализом. Установлены оптимальные условия протекания эффективного процессинга рекомбинантных препаратов прокатепсина L T. castaneum и его мутантных форм: для TcProcathL WT, TcProcathL V277I и TcProcathL V277T инкубирование 180 минут при 37ºС и рН 4,0; для TcProcathL V277A инкубирование 230 минут при 37ºС и рН 4,0. Обнаружено, что мутантные формы TcProcathL V277Y и TcProcathL V277D процессингу не подвержены. Показано, что рекомбинантные препараты мутантных форм катепсина L T. castaneum активны в широком диапазоне рН от 3,0 до 9,0, проявляя максимальную активность при рН 7,5. Активность катепсина L дикого типа практически совпадает с активностью мутанта TcCathL V277I, а активность TcCathL V277A и TcCathL V277T вдвое ниже. Установлено, что все изученные препараты рекомбинатных катепсинов L стабильны в области значений рН 3,0 - 8,0. Самым устойчивым в диапазоне рН от 3,0 до 6,0 является мутант TcCathL V277А, стабильность катепсина L дикого типа и других мутантных форм в этом интервале рН ниже. Изучена субстратная специфичность рекомбинантных препаратов мутантных форм катепсина L T. castaneum: TcCathL WT, TcCathL V277T, TcCathL V277I, TcCathL V277А. Эффективность гидролиза субстратов исследованными ферментами уменьшается в ряду: Z-FR-pNA >Glp-FQ-pNA >Glp-FL-pNA >Glp-VA-pNA >Glp-FA-pNA >Z-RR-pNA. Показана способность рекомбинантных препаратов мутантных форм катепсина L T. castaneum гидролизовать субстраты, содержащие фрагменты иммуногенных пептидов глиадинов при значении рН 3,0, близком к физиологическому в желудке человека. Установлено, что наибольшей эффективностью обладает мутантная форма TcCathL V277T.
- Добавил в систему: Элпидина Елена Николаевна