|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Изучение структурных особенностей примембранного и трансмембранного доменов рецептора нейротрофинов TrkAдипломная работа (Бакалавр)
- Научные руководители: Воейков Владимир Леонидович, Гончарук Сергей Александрович
- Автор: Васильева Екатерина Владимировна
- Тип: Бакалавр
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2021
- Аннотация: Нейротрофины являются ключевыми игроками в процессе развития нервной системы, поскольку являются факторами роста. Они принимают важное участие в процессах жизнедеятельности нейронов, таких как синаптическая пластичность, запрограммированная клеточная гибель, защита от апоптоза, миграция и дифференциация. Экспрессия нейротрофинов напрямую связана с проявлением различных фенотипических признаковОдним из наиболее известных представителей специфических рецепторов нейротрофинов является TrkA. Он имеет участок связывания для фактора роста нейронов (NGF. TrkA на сегодняшний день не изучен достаточно хорошо, чтобы полностью понимать его работу. Ранее считалось, что взаимодействие с NGF приводит к димеризации рецептора и активации киназного домена. Однако более свежие работы показывают, что на поверхности мембраны TrkA может присутствовать и в виде неактивного димера. На сегодняшний день недостаточно данных, чтобы иметь полную картину о том, как сигнал передается к трансмембранному домену, поэтому мы одновременно изучаем структуру примембранного и трансмембранного доменов, с помощью ЯМР спектроскопии, чтобы установить принципы их работы и взаимосвязь между ними. В данной работе мы приводим высокоэффективные протоколы продукции связки примембранного и трансмембранного доменов в системе бесклеточного синтеза, выходы составили порядка миллиграмма с миллилитра реакционной смеси. Кроме того, представлены протоколы очистки данного белка, включающие металл-хелатную аффинную хроматографию и гель-фильтрацию. Показано, что наиболее удобной средой, имитирующей мембранное окружение, являются бицеллы DMPC/CHAPS. В данном окружении трансмембранный домен принимает форму альфа спирали, а примембранный регион находится в растворе. С использованием метода ЯМР были описаны структурные характеристики обеих частей исследуемого фрагмента рецептора TrkA. Для трансмембранного домена получены параметры альфа-спирали, а для примембранного региона - описаны его структурные элементы и их подвижность.
- Добавил в систему: Воейков Владимир Леонидович