|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
ПОИСК ПУТЕЙ ИНГИБИРОВАНИЯ NK-ОПОСРЕДОВАННОГО КЛЕТОЧНОГО ЛИЗИСА В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК, НЕ ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ HLA-I.дипломная работа (Бакалавр)
- Научные руководители: Лагарькова М.А., Богомякова М.Е.
- Автор: Колесникова О.А.
- Тип: Бакалавр
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова, кафедра иммунологии биологического факультета МГУ
- Год защиты: 2019
- Аннотация: Плюрипотентные стволовые клетки (ПСК) обладают способностью к неограниченной пролиферации и способны к образованию всех типов тканей организма. ПСК бывают двух типов: эмбриональные стволовые клетки, которые получают из внутренней клеточной массы бластоцист, и индуцированные стволовые клетки (ИПСК), которые получают при репрограммировании соматических клеток с помощью набора транскрипционных факторов - «коктейля Яманака»: Oct4, Sox2, Klf4 и c-Myc. ПСК потенциально могут служить источником клеточной массы для последующей направленной дифференцировки в необходимый тип клеток и трансплантации. Тем не менее, острой проблемой остается гистосовместимость донора и реципиента, связанная с высоким полиморфизмом генов главного комплекса гистосовместимости - как HLA I класса, так и HLA II класса, что в дальнейшем может приводить к последующему лизису и отторжению трансплантированных производных ПСК. При аллогенной трансплантации органов и тканей отторжение связано с распознаванием чужеродных молекул HLA клетками иммунной системы, главным образом CD8+Т-лимфоцитами, которые взаимодействуют через Т-клеточный рецептор с молекулами главного комплекса гистосовместимости, что приводит к уничтожению трансплантированных клеток. Поэтому, главной задачей в трансплантологии является правильный подбор донора, гаплотип HLA которого должен совпадать с таковым у реципиента. В противном случае развивается острое или хроническое отторжение, и требуется иммуносупрессионная терапия, которая, в свою очередь, может привести к ослаблению иммунитета, развитию инфекционных заболеваний, а также может способствовать развитию опухолей. Использование ИПСК теоретически может обеспечить персонализированную терапию с использованием аутологичных клеток пациента, однако их получение требует большого времени и средств, что не всегда является возможным. Потенциальным решением вышеперечисленных проблем может стать создание «универсальных» линий ПСК, производные которых подходили бы для трансплантации всем реципиентам. Один из возможных подходов - снижение экспрессии молекул HLA I класса на поверхности ПСК за счет нокаута гена β-2-микроглобулина (b2m) (Wang D. et al., 2015). B2m является наиболее консервативной структурой и отвечает за формирование структуры молекул HLA-I. Соответственно, при его инактивации образование функционального белка невозможно. При отсутствии экспрессии HLA-I не должен наблюдаться иммунный ответ CD8+Т-лимфоцитов. В то же время молекулы HLA I класса служат лигандами для ингибиторных рецепторов натуральных киллеров, поэтому отсутствие HLA-I должно делать производные ПСК с инактивацией гена b2m чувствительными к NK клеточному лизису. Теоретически, активацию NK клеток можно снизить за счет гиперэкспрессии растворимой формы MICA (от MHC-I related chain A). Связывание MICA с NKG2D рецептором будет способствовать ингибированию NK клеток и снижению их цитотоксичности. Другим вариантом создания гипоиммуногенных клеток является экспрессия неканонических молекул HLA-I класса, HLA-G. Данные молекулы экспрессируются на плаценте для предотвращения отторжения плода организмом матери. Целью данной работы являлся поиск возможных путей ингибирования NK-опосредованного лизиса в культурах клеток, не экспрессирующих HLA I класса. Задачи: 1. Дифференцировать ИПСК с нокаутом гена b2m и изогенные ИПСК дикого типа в фибробластоподобные производные 2. Проанализировать экспрессию HLA – I класса и b2m у нокаутных фибробластоподобных производных и производных линии дикого типа 3. Оценить иммуногенность нокаутных фибробластоподобных производных и производных линии дикого типа при сокультивировании с аллогенными CD8+T-лимфоцитами и NK клетками 4. Оценить влияние экспрессии растворимой формы MICA:008 на цитотоксичность NK клеток
- Добавил в систему: Богомякова Маргарита Евгеньевна