|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Влияние аминокислотных замен в цистатионин-бета-синтазном домене CBS1 на стабильность и регуляцию бактериальной пирофосфатазыдипломная работа (Специалист)
- Научный руководитель: Анашкин В.А.
- Автор: Кириллова Е.А.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2022
- Аннотация: Неорганическая пирофосфатаза (PPаза, EC 3.6.1.1) – фермент, который катализирует гидролиз пирофосфата до ортофосфата. Пирофосфат (PPi) очень важен в биохимии, так как является побочным продуктом многих биосинтетических процессов, протекающих в клетке, например, PPi образуется при гидролизе АТP. Таким образом, уменьшение концентрации PPi способно сдвигать равновесие в сторону продуктов биосинтеза. Наиболее изученными на настоящий момент являются растворимые РРазы семейства II, четверть из которых содержит регуляторную вставку, состоящую, в том числе, из двух доменов цистатионин β-синтазы (CBS), так называемые CBS-РРазы. Структурный механизм регуляции CBS-РРазы не известен. Стоит отметить, что CBS домен присутствует и в других белках как эукариот, так и прокариот, в том числе, патогенных, и понимание механизма регуляции с помощью этого домена на примере бактериальной пирофосфатазы может помочь в антибактериальных исследованиях. Выделяют три пути регуляции активности этого фермента: кинетическая кооперативность, аллостерическая регуляция и кооперативность связывания лигандов. Недавние исследования с помощью точечных замен в CBS2- и каталитическом DHH-доменах обнаружили несколько аминокислотных остатков, важных для регуляции CBS-РРазы. В данной работе для определения структурного механизма регуляции изучались остатки, находящиеся в CBS1-домене. Такими кандидатами на участие в стабилизации и регуляции CBS-PPазы стали 7 остатков: Lys95, Lys100, Val117, Gly118, Ser121, Tyr124, Glu126. Перечисленные остатки были заменены на аланин с помощью сайт-направленного мутагенеза, чтобы убрать их вклад и проанализировать изменения в стабильности и регуляции CBS-PPазы. Некоторые остатки были заменены дополнительно на другие остатки: Val117 был также заменен на Thr, а Gly118 дополнительно на серин. Кинетический анализ полученных мутантных форм позволил сделать вывод о том, что 5 из 7 исследованных остатков CBS1-домена вовлечены в регуляцию CBS-РРаз.
- Добавил в систему: Анашкин Виктор Андреевич