|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Изучение центрального домена (CR) белка А1 вируса желтухи свеклы (BYV)дипломная работа (Магистр)
- Научные руководители: Владимир Алексеевич Гущин, Влентин Владимирович Макаров, Андрей Николаеич Князев
- Автор: Махотенко Антонида Викторовна
- Тип: Магистр
- Организация, в которой проходила защита: ФГБОУ ВО РГАУ - МСХА имени К.А. Тимирязева
- Год защиты: 2016
- Аннотация: Клостеровирусы распространены по всему миру и некоторые из них вызывают экономически важные заболевания растений. Пожелтение, некроз жилок и сворачивание листьев являются основными симптомами вызывающими серьезные потери урожая. Естественно, круг растений-хозяев для индивидуальных клостеровирусов, как правило, довольно узок, хотя вирус желтухи свеклы, например, при искусственной инокуляции способен инфицировать около 100 видов растений в 15 семействах. Экономическая важность клостеровирусной инфекции сравнима с потивирусными (которые принято считать наиболее опасными вирусами культурных растений). Целью данной работы являлось изучение центрального домена (CR) белка А1 вируса желтухи свеклы (BYV). В процессе работы была изучена организация CR, представляющего из себя слабоконсервативную последовательность, находящуюся между доменами метилтрансферазы и хеликазы в составе белка предшественника, подвергающегося процессингу в процессе трансляции. В составе CR были обнаружены короткие участки консервативные для семейства клостеровирусов. Так как ранее фрагменты CR не были обнаружена in vivo, для изучения функций домена его фрагменты были экспрессированы в виде фьюжен белков с зеленым флуоресцирующим белком. Было показано, что С-концевая половина CR (CR-2) участвует в образовании везикул размером 1 мкм, напоминающих мембранные структуры, образуемые в процессе репликации BYV (мембранные репликативные комплексы). Таким образом, предположительная роль центрального домена – участие в формировании мембранных структур нужных для репликации BYV. Используя делеционный мутагенез в составе CR-2 были обнаружены последовательности ответственные за образование везикул и их агрегацию вокруг ядра. Данные делеционного и точечного мутагенеза подтверждают роль гидрофобного кластера в составе короткого консервативного фрагмента CR-2. Для изучения процессинга и роли лидерной протеиназы (PCP) процессинг CR был изучен в составе in vitro транслированных белков предшественников. Вероятно, что данный новый мембрано-моделирующий домен полипротеина 1а ВЖС может быть вовлечен в процесс биогенеза мультивезикулярного комплекса in vivo, который являются сайтом репликации клостеровируса в зараженных клетках. Также, нами были обнаружены фрагменты CR в клетках зараженных растений, образуемые в результате процессинга. Было установлено, что папаин-подобная протеиназа (РСР) принимает непосредственное участие в этом процессе. Работа представляет интерес для вирусологов, биотехнологов, молекулярных биологов, а также физиологов растений.
- Добавил в систему: Гущин Владимир Алексеевич