|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Функциональный анализ мутаций в гене фактора транскрипции NeuroD1 при моногенной форме диабета MODY6дипломная работа (Магистр)
- Научные руководители: Рубцов Петр Михайлович, Щелкунова Татьяна Анатольевна
- Автор: Каримова Анастасия Олеговна
- Тип: Магистр
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова, Биологический факультет МГУ имени М.В.Ломоносова
- Год защиты: 2023
- Аннотация: В настоящий момент более 10% населения планеты больны диабетом. Существуют редкие формы сахарного диабета. К ним относятся моногенные заболевания MODY с аутосомно-доминантным типом наследования. Одна из форм сахарного диабета типа MODY вызвана мутациями, затрагивающими фактор нейрогенной дифференцировки-1 (NeuroD1). Этот фактор транскрипции экспрессируется в зрелых и развивающихся β-клетках, а также в кишечнике и в нейронах центральной и периферической нервной системы, играет ключевую роль в ранней дифференцировке клеток поджелудочной железы. В настоящее время известен ряд мутаций в гене NeuroD1, ассоциированных с диабетом типа MODY6 в разных популяциях. В связи с этим целью исследования явилась функциональная характеристика не описанных ранее мутаций в гене фактора нейрогенной дифференцировки NeuroD1. Для достижения цели необходимо было получить конструкции для экспрессии мутантных вариантов NeuroD1 в клетках млекопитающих; получить конструкции с репортерным геном для оценки транскрипционной активности NeuroD1 и его мутантных вариантов; сравнить влияние NeuroD1 и его мутантных вариантов на активность промоторов генов соматостатина, глюкокиназы, инсулина, а также проанализировать его взаимодействие с известным белковым партнером — транскрипционным фактором E47 в системе временной экспрессии генов при трансфекции клеток млекопитающих. Эксперименты были проведены на культуре клеток инсулиномы мыши MIN6. Путем двухраундного мутагенеза были получены плазмиды для экспрессии нескольких вариантов NeuroD1 в клетках млекопитающих. Клонированы мутантные варианты гена фактора транскрипции NeuroD1, ассоциированые с диабетом MODY6. Получены плазмиды, содержащие мутантные гены NeuroD1, под контролем промотора цитомегаловируса. Изучено влияние мутантных вариантов NeuroD1 на активность промоторов инсулина, соматостатина и глюкокиназы человека в системе временной экспрессии генов на клетках инсулиномы MIN6. Подтверждено инактивирующее действие мутаций NeuroD1 R103P и E110K на транскрипцию с промотора гена инсулина. Показано активирующее влияние этих мутаций на активность промоторов генов соматостатина и глюкокиназы. Показано, что мутантный вариант NeuroD1 E110K в присутствии E47 — белка-коактиватора NeuroD1 — активирует транскрипцию с промотора гена инсулина. Установлено, что в использованной системе временной экспрессии генов мутации G12R и H241Q NeuroD1 не влияют на активность промотора инсулина, соматостатина и глюкокиназы.
- Добавил в систему: Щелкунова Татьяна Анатольевна