Аннотация: Целью работы являлось получение рекомбинантного белка NEP и изучение его физико-химических свойств, а также взаимодействия с М1. В результате проведенных экспериментов:
- получена серия плазмидных векторов, позволяющая получать NEP и его мутантные варианты (W78G иW78Y,) с аффинным His-модулем и без него;
- получены продуценты соответствующих белков и исследовано распределение экспрессируемых белков в цитоплазме и в «тельцах включения» в зависимости от их структуры; разработана оригинальная технология выделения белка NEP на основе растворения «телец включения» в растворе SDS;
- изучены агрегационные и структурные свойства полученых белковых препаратов, показано, что белок NEP находится в растворе в виде агрегатов, включающих в себя не менее 50-60 мономеров;
- выделенные белковые препараты использованы для получения первых данных in vitro о взаимодействии белка NEP с матриксным белком M1, показали невозможность использования этого подхода для получения комплекса M1-NEP.
- получена плазмидная конструкция, содержащей опероны белка M1 и hNEP, для одновременной синхронной экспрессии in vivo.
Полученные данные могут служить основой для дальнейших исследований и разработки подходов, позволяющих детектировать взаимодействие NEP и M1.