|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
LysK-Lyso, химерный фермент, лизирующий клетки Staphylococcus aureus: особенности физико-химических свойств и взаимодействия полимерамидипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Филатова Л.Ю., Клячко Н.Л.
- Автор: Ишназарова Н.Т.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2014
- Аннотация: Staphylococcus aureus является возбудителем многих опасных заболеваний. Следствием использования антибиотиков во всех современных методиках лечения стафилококковых инфекций стало возникновение огромного числа новых штаммов бактерий, устойчивых к ним. Бактериолитические ферменты, в частности литические ферменты фагов, можно использовать в качестве антимикробного средства. Они имеют множество неоспоримых преимуществ: эффективность действия против антибиотико-резистентных патогенов, высокая селективность действия, низкая вероятность появления штаммов, устойчивых к ним, синергетический эффект при действии с другими антибактериальными агентами. Антистафилококковые лизины, однако, все же обладают рядом недостатков, таких как неустойчивость к протеолизу, небольшая стабильность в условиях хранения и функционирования. Эти недостатки можно устранить путем включения этих ферментов в матрицы из нетоксичных полимеров. На данный момент исследования по созданию и изучению полимер-ферментных комплексов практически не проводились в отношении бактериолитических ферментов. Таким образом, цель работы – исследование структуры, кинетических свойств и особенностей взаимодействия с полимерами химерного антистафилококкового эндолизина LysK-Lyso и сравнение полученных данных с аналогичными характеристиками фермента LysK. На основании проделанной работы можно сделать следующие выводы: Исследовано влияние физико-химических параметров среды на активность LysK-Lyso и LysK, обнаружены изменения рН-профиля в щелочную область на одну единицу, появление оптимума концентрации низкомолекулярных электролитов, увеличение удельной активности в 1,5 раза фермента LysK-Lyso по сравнению с LysK. Изучена стабильность LysK-Lyso и LysK в условиях хранения и функционирования, показано, что химерный фермент более стабилен: периоды полуинактивации для него больше в 2 раза. Установлено, что, вероятно, основной причиной инактивации LysK является агрегация, а LysK-Lyso – разворачивание белковой глобулы и протеолиз. Методом ИКФП показано, что причиной потери активности LysK-Lyso является изменение во вторичной структуре фермента: увеличение содержания β-структур на 10% и уменьшение содержания α-спиралей в 2 раза. Показано, что при взаимодействии LysK-Lyso с анионными полимерами происходит образование комплексов; влияние полианионов на активность и стабильность фермента зависит от физико-химических условий формирования комплексов и природы ионогенных групп. Выявлено инактивирующее действие ПАК и ДС на LysK и LysK-Lyso, 2 – 5 кратное увеличение стабильности химерного фермента в комплексах с ПГК10-ПЭГ114 и незначительное увеличение стабильности LysK под влиянием ПГК100-ПЭГ114 и ПГК50-ПЭГ114. Установлено, что причина инактивации ферментов в комплексах с ПАК и ДС – изменение их вторичной структуры.
- Добавил в систему: Филатова Любовь Юрьевна