|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
Экспрессное определение монофталатов иммунохимическими методами в открытых водоёмахдипломная работа (Специалист)
- Научный руководитель: Мухаметова Л.И.
- Автор: Пономаренко Е.Е.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2024
- Аннотация: Фталаты или диэфиры фталевой кислоты используются как пластификаторы для улучшения свойств пластмасс при производстве пластиковой посуды, игрушек, товаров медицинского назначения. Неправильная утилизация этих изделий приводит к тому, что фталаты попадают в окружающую среду почвы и водоёмы. Многочисленные исследования на животных и клинические исследования на людях показали, что фталаты вызывают нарушения эндокринной, половой, нервной, сердечно-сосудистой, а также покровной систем. Наиболее часто применяются дибутилфталат, диэтилгексилфталат и бутилбензилфталат. Данные диэфиры могут деградировать до монофталатов (монобутил-, монобензил- и моногексил фталатов, МВР, МBzP, MCHP, соответственно), которые также токсичны, как и дифталаты. Поэтому существует необходимость в разработке простых и быстрых методов определения токсикантов в объектах окружающей среды. Целью дипломной работы является разработка и оптимизация метода поляризационного флуоресцентного иммуноанализа (ПФИА) для определения монофталатов и их обнаружения в открытых водоёмах. Метод поляризации флуоресценции (ПФ) основан на способности флуоресцентной молекулы после возбуждения плоскополяризованным светом излучать различную интенсивность в разных плоскостях. Эти измерения можно применять для количественной оценки сигнала ПФ. ПФИА – это иммунохимический метод определения веществ, основанный на конкуренции определяемого антигена и антигена, меченного флуоресцентным соединением (трейсером), за связывание со специфическими антителами и определении сигнала поляризации флуоресценции в реакционной смеси. При фиксированной концентрации антител и трейсера поляризация флуоресценции будет обратно пропорциональна концентрации определяемого вещества в образце. В работе было изучена кинетика связывания трейсеров MBP-EDF и MBzP-EDF с соответствующими специфическими антисыворотками полученными в разные циклы иммунизации и показано, что уже после 1-го цикла иммунизации получены антитела. Подобраны пары иммунореагентов (антисыворотка/трейсер) для определения MBP и MBzP, antiMBP2203/MBP-GAF и antiMBzP2110/MBzP-EDF, соответственно. Был оптимизирован метод ПФИА (оптимизированы концентрации трейсеров и антител), получены калибровочные зависимости для выявления MBP и MBzP. Определены аналитические характеристики калибровочных кривых, полученных при оптимальных условиях. Пределы обнаружения в воде для MBP и MBzP составили 0,1 мкг/мл и 0,33 мкг/мл, соответственно. Так же были показана специфичность анализа к монофталатам и продемонстрирована группспецифичность анализа. Методика апробирована методом введено-найдено в воде с процентом открытия в диапазоне 89-106%. Проведён анализ образцов из открытых водоёмов (Москвы реки и Онеги) и показано отсутствие монофталатов.
- Добавил в систему: Мухаметова Лилия Инилевна