|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИПМех РАН |
||
: Создание невирусной плазмидной конструкции, содержащей нуклеазу Cas9, для регуляции экспрессии гена урокиназного рецептора в линейной культуре клеток нейробластомыкурсовая работа (Магистр)
- Научный руководитель: Семина Е.В.
- Автор: Шмакова Анна
- Тип: Магистр
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Кафедра: Кафедра биохимии и регенеративной биомедицины
- Год защиты: 2016
- Курс: 4
- Аннотация: Аннотация: Урокиназная система - урокиназа и ее рецептор uPAR - играет роль в регуляции процессов роста, адгезии, миграции клеток, действуя как напрямую в качестве протеазы и разрушая внеклеточный матрикс, так и запуская внутриклеточный сигнальный каскад. В связи с этим представляется интересным изучить ее роль в нервной системе на примере культуры клеток N2A.Целью настоящей работы стало создание невирусных конструкций на основе системы CRISPR/Cas9 для регуляции экспрессии гена урокиназного рецептора (PLAUR) в культуре клеток нейробластомы (N2A). Для модификации гена PLAUR было решено сконструировать векторы, несущие в своем составе последовательности никазы и гидовые РНК (sgРНК) к четвертому экзону . Кроме того, создание вектора, несущего плечи гомологии и вставку со стоп-кодоном, позволит проводить гомологичную репарацию гена. Таким образом, предполагается внести стоп кодон в четвертый экзон гена PLAUR. В результате работы получено два вектора pX458nickase (D10A), содержащих гидовые РНК к близким участкам четвертого экзона гена PLAUR, получен вектор, содержащий плечи гомологии к четвертому экзону гена PLAUR и несущий вставку со стоп-кодоном, эффективность трансфекции pX458nickase (D10A) составила 49 %.
- Добавил в систему: Семина Екатерина Владимировна