Аннотация:Флуориметрический метод анализа является одним из самых чувствительных, позволяя определять присутствие вещества в очень низких концентрациях. Однако к самостоятельной флуоресценции способны немногие вещества, что ограничивает область применения метода. Для ее расширения используют химическое взаимодействие определяемых веществ с флуорофорами, специально синтезируемыми для этих целей, что удается реализовать отнюдь не для любого наперед заданного аналита. Чтобы дополнительно расширить круг веществ, определяемых флуориметрически, целесообразно перейти к нековалентным взаимодействиям аналит – флуорофор. В частности, существует группа методов, в которых интенсивность флуоресценции меняется при изменении степени агрегации в системе ПАВ – аналит – краситель (так называемые aggregation-based methods).
Особенно важна задача поиска флуорофоров, подходящих для анализа в живых системах. Эти вещества должны быть не токсичными и не деструктивными по отношению к биологическим объектам. Кроме того, их флуоресценция не должна перекрываться с собственной флуоресценцией тканей, а возбуждающее излучение должно легко через них проникать. Логичным решением было бы обратиться к флуорофорам биогенного происхождения. Например, природный флуорофор хлорофилл – зеленый пигмент растений – поглощает в красной и излучает на границе красной и ИК-области спектра. Тем не менее, до настоящего времени не проведено исследований, посвященных изучению возможности его применения как флуориметрического реагента.
Цель данной работы – изучение возможности использования хлорофилла а в качестве флуориметрического реагента для определения органических веществ. Предполагалось, что краситель будет встраиваться в частицы, образующиеся при агрегации аналита с противоположно заряженным ПАВ, за счет чего будет возрастать его квантовый выход. Задачи работы – изучение влияния природы модельных аналитов и ПАВ на флуоресценцию хлорофилла, демонстрация возможности определения одного из аналитов в реальном объекте.
Выводы
Хлорофилл а выделен из листьев шпината по литературным методикам (экстракция ацетоном, двукратная сорбционная очистка на колонке с сахарозой) и охарактеризован спектрами поглощения и флуоресценции.
Хлорофилл, по-видимому, впервые изучен в качестве флуориметрического реагента в водных растворах ПАВ-аналит при изменении агрегации системы. Для этого изучено его отношение к стандартным наборам гидрофобных и водорастворимых модельных веществ (1.5•10–3 М). Из числа последних влияние оказывают только аминогликозиды в присутствии ДДС и лаурилсаркозината, причем как при субмицеллярных (0.1 ККМ), так и при мицеллярных (3 ККМ) концентрациях ПАВ.
Показана возможность определения неомицина с ДДС и N лаурилсаркозинатом натрия флуориметрическим методом в диапазоне 1.4×10-5 – 9.0×10-5 М в воде и в моче человека.
На интенсивность флуоресценции хлорофилла в системе ДДС–неомицин не влияют 1.5×10-3 М растворы глюкозы, мочевины, диэтиламина, анилина, аспарагината, цитрата, фосфата, иодида; сильнее мешают многозарядные ионы: сульфат, пирофосфат, кальций, а также белок (БСА).
Интенсивность флуоресценции хлорофилла в системе ДДС-неомицин почти не зависит от рН в интервале 3 – 8 и добавок ацетона (до 5% об.).