Аннотация:Метод транзиентной экспрессии (ТЭ) генов, основанный на доставке генетического материала вируса в растительную клетку при помощи Agrobacterium tumefaciens, широко используется в биологических исследованиях в качестве инструмента для изучения клеточного транспорта, проверки функциональной активности генов и препаративного накопления рекомбинантных белков. Также данный метод применяется в биотехнологии, где при помощи систем ТЭ получают фармацевтические белки, включая вакцины и антитела.
Однако, синтез целевых белков с помощью ТЭ представляет собой искусственную ситуацию для растительной клетки, которая вынуждена производить большие количества белка.
Ранее в нашей лаборатории было показано, что суперпродукция зеленого флуоресцентного белка приводит к некротизации листьев. Для выявления генов, экспрессия которых изменяется в результате клеточной смерти, вызванной суперпродукцией белка, был проведен сравнительный анализ транскриптомов здорового листа Nicotiana benthamiana и листа непосредственно перед возникновением некроза методом вычитающей гибридизации. Наш интерес вызвало повышение экспрессии гомолога гена CDM1 (cell death marker 1, biotic cell death-associated protein) Nicotiana glutinosa. Идентифицированный нами новый ген был обозначен как «фактор, сопутствующий смерти клетки», или ФСС.
Целью данной работы являлось определение функции белка, кодируемого этим геном, и описание его роли в клеточной смерти растений. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
1) получение рекомбинантного белка;
2) изучение свойств белка с заменами в предполагаемом активном центре;
3) оценка уровня мРНК ФСС в органах растений.